產(chǎn)品名稱：質(zhì)粒DNA小量純化試劑盒（硅膠膜柱法）
英文名稱：Plasmid DNA purification kit（Silica membrane）
產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格：
| 編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
|---|---|---|
| TQ005D1 | 質(zhì)粒DNA小量純化試劑盒（硅膠膜柱法） | 100次/盒 |
產(chǎn)品簡介：本產(chǎn)品采用硅膠膜柱法，適合于從1~5 mL 新鮮細(xì)菌培養(yǎng)液中提取質(zhì)粒DNA。純化的質(zhì)粒可直接用于自動測序、酶切、PCR 和標(biāo)記等。30分鐘可以完成數(shù)個樣品的抽提工作，整個過程不會接觸酚氯仿等有機(jī)物抽提，也不需醇類沉淀。
儲存條件及有效期：Buffer P1和RNA酶2~8℃保存，其他可室溫保存，有效期1年（儲存過程中若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前將其在室溫放置一段時間或37℃條件下溫育，待充分溶解后搖勻即可使用）。
樣本類型：新鮮菌體培養(yǎng)液。
質(zhì)粒DNA小量純化試劑盒（硅膠膜柱法）試劑盒組成：
| 序號 | 產(chǎn)品組成 | 規(guī)格 |
|---|---|---|
| 1 | Buffer P1 | 26 mL |
| 2 | RNA酶 | 10 mg |
| 3 | Buffer P2 | 26 mL |
| 4 | Buffer NP3 | 36 mL |
| 5 | Washing Buffer | 27 mL（使用前加108 mL無水乙醇） |
| 6 | Elution Buffer | 10 mL |
| 7 | DNA硅膠膜吸附柱 | 100套 |
| 8 | 使用說明書 | 1份 |
質(zhì)粒DNA小量純化試劑盒（硅膠膜柱法）試劑盒 使用方法：
● 初次使用前加入0.2~0.5 mL Buffer P1 至RNase A 干粉中，吸打5~10次讓RNase A 充分溶解，然后把 RNase A溶解液全部轉(zhuǎn)移至 Buffer P1瓶中，于2-8℃保存；
● 初次使用前請在Washing Buffer中加入108 mL無水乙醇，參見瓶身標(biāo)簽或使用說明書。
1、將含質(zhì)粒的菌種接種于含合適抗生素的1~5mL LB肉湯培養(yǎng)基中，37℃搖床培養(yǎng)12~16 小時；
2、吸取1~5mL菌體，12,000×g 離心2分鐘;
3、倒棄培養(yǎng)基，在吸水紙輕輕拍打吸盡殘液。加入 250 μL Buffer P1（已加入RNase A），高速渦旋重懸細(xì)菌。
注意：使用前確保 RNase A 已加到 Buffer P1 中。徹底重懸細(xì)菌很關(guān)鍵，重懸后應(yīng)看不到細(xì)菌團(tuán)塊;
4、往重懸液中加入 250 μL Buffer P2，顛倒混勻 8~10 次。注意：需輕輕顛倒混勻，溶液變得粘稠且透亮表明細(xì)菌已充分裂解。如有必要，室溫放置2~3分鐘，其間顛倒混勻幾次。處理多個樣品時，這一步操作時間不要超過4分鐘;
5、加入350 μL Buffer NP3，立即顛倒8~10次讓溶液徹底中和。加入Buffer NP3 后應(yīng)立即顛倒混勻，以防止沉淀團(tuán)聚而影響中和效果，靜置2 分鐘;
6、14,000×g 離心5分鐘;
7、將 DNA硅膠膜吸附柱裝在收集管中。小心轉(zhuǎn)移離心得到的上清液至柱子中。12,000×g離心60秒;
8、棄濾液，把柱子套回收集管中。加入 650 μL Washing Buffer (已加入無水乙醇)至柱子中靜置30 秒。12,000×g 離心 60 秒;
9、棄濾液，把柱子套回收集管中。12,000×g 離心3分鐘清除殘余濾液；
● 將柱子套在滅菌的1.5 mL 離心管中可開蓋靜置5 分鐘讓殘留的乙醇盡可能揮發(fā)干凈，乙醇?xì)埩魰档蚈D260/OD230的比值。
10、把硅膠膜吸附柱套在滅菌的1.5mL 離心管中。根據(jù)需求加入30-100μL預(yù)熱至65℃的 Elution Buffer 或滅菌水至柱子的膜中央。靜置 3 分鐘，12,000 ×g離心1分鐘洗脫DNA。柱子最低的洗脫體積為30 μL。低于30μL會導(dǎo)致洗脫效率下降。若需要獲得最高產(chǎn)量，可用洗脫液重復(fù)該步驟進(jìn)行第二次洗脫；
● Elution Buffer可用無菌去離子水替代，但pH值應(yīng)在8.0~8.5。
● 將Elution Buffer預(yù)熱到65℃使用，可提高質(zhì)粒DNA得率。
● 為提高質(zhì)粒DNA提取得率，可將洗脫得到的溶液再次吸出滴加到吸附柱中央，靜置幾分鐘后再次離心收集。
11、棄硅膠膜吸附柱，把抽提得到的質(zhì)粒保存于-20℃。
純度及濃度檢測分析：
1、提取得到的質(zhì)粒DNA可用紫外分光光度計測量濃度與純度。
2、DNA在OD 260處有明顯的吸收峰，在此條件下，1 OD值的光密度相當(dāng)于雙鏈DNA濃度為50 μg/mL；單鏈DNA或RNA為40 μg/mL；寡核苷酸為20 μg/mL。
3、OD260/280=1.7~1.9，如果A260/280≤1.7或比值過低，表示受到蛋白（芳香族）或酚類物質(zhì)污染，需要純化樣品。若DNA樣品中A260/280>2.0表明樣品有RNA或DNA降解。
4、Elution Buffer使用去離子水時候，OD260/280會偏低，但不表示純度低。
質(zhì)粒DNA小量純化試劑盒（硅膠膜柱法）試劑盒 使用注意事項：
1、可先將菌種劃線至合適的含抗生素的平板上，待長出單菌落后，挑取長勢較好的單菌落接種至含抗生素的LB肉湯中培養(yǎng)12~16 h，這樣有利于提高質(zhì)粒得率。
2、本試劑盒提取使用的器皿、移液器等均應(yīng)為專用，離心管、槍頭等一次性耗材需進(jìn)行高壓滅菌。操作人員應(yīng)穿戴潔凈工作服、口罩、帽子、使用一次性無粉手套。
3、盡量使用新鮮菌液提取，可以降低質(zhì)粒DNA丟失的風(fēng)險。
4、Buffer P2使用后需盡快蓋上瓶蓋，減少與空氣中的CO2接觸，盡量避免影響提取效果。
5、Washing Buffer使用后蓋緊蓋子，以免乙醇揮發(fā)影響提取效果。
6、如果質(zhì)粒DNA需長期保存，建議使用Elution Buffer洗脫，分裝保存于-20℃或-80℃。
7、請嚴(yán)格按照本說明書操作步驟進(jìn)行，不同批號的試劑若無特殊說明，請勿混合使用，并保證在有效期內(nèi)使用該試劑盒，因操作不當(dāng)導(dǎo)致的質(zhì)粒DNA提取效果不佳，本公司概不負(fù)責(zé)。
8、妥善處理所有樣本和試劑材料，徹底清潔和消毒操作臺面。
