產(chǎn)品名稱:一體式第一鏈cDNA超級(jí)預(yù)混液(去除gDNA)
英文名稱:Plus All-in-one 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (gDNA Purge)
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格:
編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 產(chǎn)品價(jià)格 |
HKE047-01B | 一體式第一鏈cDNA超級(jí)預(yù)混液(去除gDNA) | 100次(20μl體系) | Plus All-in-one 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (gDNA Purge) | 1169 |
產(chǎn)品描述:第一鏈cDNA合成預(yù)混液是以mRNA或者總RNA為模板,高效 合成第一鏈cDNA。本產(chǎn)品含有反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的全部試劑 (II Reverse Transcriptase,RNase Inhibitor,Oligo(dT)18,Random N6,dNTPs)。反應(yīng)時(shí)只需要加入RNA模板和水即可,操作簡(jiǎn)單,降 低操作過(guò)程中的污染。本制品含有去基因組成分gDNA Purge,以 RNA為模板進(jìn)行cDNA第一鏈合成時(shí),可以同步去除基因組DNA污 染,反應(yīng)結(jié)束后,75℃加熱5分鐘,就可以失活反轉(zhuǎn)錄酶,RNA酶 抑制劑。合成的第一鏈cDNA能直接用于PCR 或熒光定量PCR的模 板,第二鏈cDNA的合成或線性RNA擴(kuò)增,也可用于需要用帶有 放射性或非放射性核苷酸標(biāo)記第一鏈cDNA的實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品特點(diǎn):
本制品采用耐高溫逆轉(zhuǎn)錄酶,大幅提高熱穩(wěn)定性和 cDNA 合 成效率;
本制品中添加的II Reverse Transcriptase 無(wú) RNase H 活性,可 避免第一鏈 cDNA 合成過(guò)程中,RNA/DNA 雜交模板鏈中 RNA 降解,保證 cDNA 合成的質(zhì)量;
本制品中 Random N6 和 Oligo(dT)18 引物比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化,可均 勻合成樣品中的 cDNA;
本制品中含有去基因組成分,反轉(zhuǎn)錄時(shí)可同步去除基因組 DNA 污染。
保存溫度:-20℃。
產(chǎn)品包裝:
注意事項(xiàng):
1)用DEPC 處理實(shí)驗(yàn)用到的所有實(shí)驗(yàn)器材,或者 購(gòu)買已經(jīng)證明無(wú)核酸酶的實(shí)驗(yàn)用具,實(shí)驗(yàn)過(guò)程戴 手套并經(jīng)常更換手套,避免 RNA 酶的污染。
2)確保所用試劑中無(wú) RNA 酶污染。
3) 試劑盒要嚴(yán)格密封保存。在反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中,所 有管子要確保扣嚴(yán)。
4) 純化過(guò)的RNA 必須保證不含有鹽,金屬離子, 乙醇和苯酚,以上成分會(huì)干擾第一鏈 cDNA 的合 成反應(yīng)??刹捎靡掖汲恋鞷NA 的方法去除掉痕量 污染物。
5) 為保證反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的有效進(jìn)行,需使用高質(zhì)量 的RNA 模板。
6) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,最快逆轉(zhuǎn)錄速度可達(dá)2kb/min, 需要提高反轉(zhuǎn)錄效率或模板含量較低時(shí)可以適當(dāng) 延長(zhǎng)反轉(zhuǎn)錄時(shí)間。
操作方法與常用PCR 循環(huán):
注意:當(dāng) RNA 濃度較高或目標(biāo)基因?qū)俑呖截惢驎r(shí),可將去基因組 和逆轉(zhuǎn)錄合為一步操作,更省時(shí)省力。所有組分加到一起,50℃孵 育15-30min,最后75℃孵育5min 終止反應(yīng)即可。
客戶應(yīng)用實(shí)例與本試劑盒在 37℃條件下保存的穩(wěn)定性驗(yàn)證: