產(chǎn)品名稱:反轉(zhuǎn)錄酶(逆轉(zhuǎn)錄酶)
中文名稱:Reverse Transcriptase
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格:
編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 產(chǎn)品價(jià)格 |
HKE123-01B | 反轉(zhuǎn)錄酶(逆轉(zhuǎn)錄酶) | 10000U×5 | Reverse Transcriptase | 2870 |
產(chǎn)品描述:本制品是通過基因重組技術(shù)克隆表達(dá)M-MuLV的缺失突變型 RNase H-的反轉(zhuǎn)錄酶。一般的野生型M-MuLV(Moloney Murine Leukemia Virus)具有以下幾種活性:依賴于RNA的DNA聚合酶活 性;依賴于DNA的DNA聚合酶活性;RNase H活性。由于RNaseH 能夠催化降解 DNA/RNA雜合體中的RNA,因此在cDNA第一條鏈 的合成反應(yīng)中可能會(huì)降解RNA/DNA雜合體中的模板RNA。本酶的 RNase H活性缺失,延伸能力強(qiáng),可用于較長的cDNA合成,高比 例的全長cDNA文庫的構(gòu)建以及Real Time RT-PCR反應(yīng)等。
反轉(zhuǎn)錄酶 產(chǎn)品用途:
1) 1st Strand cDNA的合成;
2) cDNA Probe的制備;
3) RT-PCR反應(yīng)以及Real Time RT-PCR反應(yīng)。
保存溫度:-20℃。
產(chǎn)品反應(yīng) Buffer 中含有高濃度的 DTT,低溫下或者凍融可 能會(huì)導(dǎo)致沉淀析出,請(qǐng)恢復(fù)至室溫并輕搖混勻后使用。
Reverse Transcriptase 產(chǎn)品包裝(A包裝):
反轉(zhuǎn)錄酶 質(zhì)量保證:經(jīng)多次柱純化,SDS-PAGE 膠檢測(cè)僅可見清晰單一 目的條帶,PCR 方法檢測(cè)無大腸桿菌 DNA 殘留,無核 酸內(nèi)、外切酶污染,無 RNA 酶污染。
反轉(zhuǎn)錄酶 活性定義:以Poly(rA)?Oligo(dT)為模板/引物,在37℃、10 分鐘條件下,摻入1 nmol的[3H] dTTP所需要的酶量定 義為1個(gè)活性單位。
逆轉(zhuǎn)錄酶 操作方法與常用PCR循環(huán):
使用Reverse Transcriptase 注意事項(xiàng):
1) 用DEPC處理實(shí)驗(yàn)用到的所有實(shí)驗(yàn)器材,或者 購買已經(jīng)證明無核酸酶的實(shí)驗(yàn)用具,實(shí)驗(yàn)過程戴手套 并經(jīng)常更換手套,避免RNA酶的污染。
2) 確保所用試劑及超純水中無RNA酶污染。
3) 純化過的RNA必須保證不含有鹽,金屬離子, 乙醇和苯酚,以上成分會(huì)干擾第一鏈cDNA的合成反 應(yīng)。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。
4) 為保證反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的有效進(jìn)行,需使用高質(zhì)量 的RNA模板。