產(chǎn)品名稱：2×pSC-T vector Fast Ligation Mix
產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格：
| 編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價格 |
| HKT004-01A | 2×pSC-T vector Fast Ligation Mix | 20次 | T載體 | 540 |
| HKT004-01B | 20次×5 | 2398 |
產(chǎn)品描述：
Simple Cloning T-vector 是一種 PCR 產(chǎn)物高效 TA 克隆 的專用 T 載體，它由 pUC18 載體改造而成，去除了 PCR 產(chǎn) 物插入?yún)^(qū)域兩側(cè)所有的酶切位點。PCR 產(chǎn)物克隆后如果使 用其兩端的酶切位點進行酶切時，T載體上不會有相同的酶 切位點影響酶切反應(yīng)，可以大大提高酶切效率，增加亞克隆 成 功率。多克隆位點的消除并不影響 β-半乳糖苷酶的正常表 達，PCR 產(chǎn)物克隆后仍可以利用 α-互補性進行藍白斑篩選， 挑選陽性克隆。
傳統(tǒng)T 載體在進行連接時的操作程序是：載體、片段、 T4 DNA Ligase Buffer、T4 DNA Ligase。本制品是在傳統(tǒng)模 式上將除了插入片段的各成分進行預(yù)混，并使其在穩(wěn)定性、 轉(zhuǎn)化子數(shù)目、陽性率方面不低于傳統(tǒng)模式，使用時只需加入插入片段即可，大大簡化了操作過程，降低了配制連接體系 過程中的誤差和污染率，節(jié)省了時間。
產(chǎn)品特點：
高效：快速連接，15 分鐘即可完成連接反應(yīng)。
穩(wěn)定：-20℃取出反復凍融 20 次，克隆數(shù)目及陽性率 不受影響。
快捷：只需加入插入片段在補充去熱源水到 10μL 體系
使用建議：
1）連接使用的 PCR 片段3' 端應(yīng)帶有 A 末端，如果是使用 pfu 等高保真聚合酶擴增的不帶 A 末端的平末端片段， 不 可直接用于進行連接反應(yīng)。
2）克隆時使用的 Insert DNA 片段（PCR 產(chǎn)物）建議進行 切膠回收純化，否則 PCR 產(chǎn)物中的短片段 DNA、殘留引 物等雜質(zhì)都會影響 TA 克隆效率。
3）轉(zhuǎn)化過程中建議使用 Control Insert DNA 做對照，以便 在實驗出現(xiàn)問題時確定原因。
保存溫度：-20℃
2×pSC-T vector Fast Ligation Mix 產(chǎn)品包裝（A包裝）：
質(zhì)量保證：
Control Insert 克隆后的白色菌落中，有 90%以上 含有 Insert DNA 片段。
Control Insert 經(jīng)克隆后，經(jīng)測序確認''T''突出的存在。
操作方法：
1） 快速連接反應(yīng)體系：
| 組分 | 體積 |
| 2×pSC-T vector Fast Ligation Mix (10 ng/μL) | 10μL |
| 目的PCR 片段/ Control Insert DNA | X μL/1μL |
| ddH2O | 至 20μL |
反應(yīng)條件：16℃或 25℃下，保溫15至30分鐘。
注：保溫5分鐘也能正常進行連接反應(yīng)，但反應(yīng)效率略 為降低。25℃下進行連接，其效果略差于16℃下連接效果。 而更高的溫度（>26℃）則較難形成環(huán)狀DNA。
2）取10μL加入至100μL感受態(tài)細胞中，用移液槍吹打 混合，冰上放置30分鐘。
3）將離心管置于42℃水浴中，熱擊60-90秒，迅速將離 心管置于冰上，放置2-3分鐘。
4）向每個離心管中加入500μL無菌不含抗生素的LB 或SOC培養(yǎng)基中，37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘，使 質(zhì)粒上氨芐抗性基因表達，菌體復蘇。
5）吸取 200μL 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞，加到含氨芐青霉素的 LB 或 SOC 固體平板上，用無菌涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于 37℃培 養(yǎng)箱里直至液體完全吸收，倒置培養(yǎng) 12-16 小時。
6） PCR 檢測，利用試劑盒自帶的高速PCR 擴增試劑 2×FastTaq Mast Mix 直接進行菌落PCR 鑒定。
