產(chǎn)品名稱：Biotin Competent Cell
中文名稱：Biotin 感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：
| 編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價(jià)格 |
| HKV207-01A | Biotin Competent Cell | 100μl×10支 | 感受態(tài)細(xì)胞 | 620 |
產(chǎn)品描述：
Biotin 修飾的蛋白質(zhì)是用于蛋白質(zhì)相互作用研究中的有力工 具，通過目標(biāo)蛋白融合表達(dá) Avi Tag，可實(shí)現(xiàn)位點(diǎn)特異性的 Biotin 修飾，可最大限度的減少對(duì)蛋白質(zhì)活性的影響。Avi Tag 的 Biotin 修 飾 可 以 在 體 內(nèi) 或 體 外 （ Avi-Biotinylation Kit ， Cat.No ： HKPE013）進(jìn)行。Biotin Competent Cell 是含有高表達(dá) Avi Tag 生 物 素 化 酶 的 BL21 （ DE3 ） 感 受 態(tài) 細(xì) 胞 。 配 合 使 用 pAvi-C （Cat.No：HKV104）載體可獲得最佳生物素修飾效果。
注意：宿主菌為氯霉素抗性。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
高效表達(dá) Avi Tag 生物素化酶。
實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白 Biotin 修飾。
基因型：E.coli BL21（DE3）來源于 B 株，為 Lon 蛋白水解酶、ompT 外膜蛋白水解酶缺陷型。
轉(zhuǎn)化效率：使用 pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率≥1×10?cfu/μg。
保存溫度：-70℃
Biotin Competent Cell 產(chǎn)品包裝（A包裝）：
| 產(chǎn)品組成 | 體積 |
| Biotin Competent Cell | 100μl×10 |
| Control DNA pUC19(1ng/μl) | 10μl |
操作方法：
1）取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì) 胞的用量為 50-100μl，可根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。所 用 DNA 的體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞的十分之一，以下 實(shí)驗(yàn)以 100μl 感受態(tài)細(xì)胞為例。
2）待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加 入目的 DNA（通常 100μl 感受態(tài)細(xì)胞能夠被 1ng 超螺 旋質(zhì)粒 DNA 所飽和），用移液槍吹打混合，冰上放置 30 分鐘。
3）將離心管置于 42℃水浴中，熱擊 60-90 秒，迅 速將離心管置于冰上，放置 2-3 分鐘。
4）向每個(gè)離心管中加入 500μl 無菌不含抗生素的 LB 或 SOC 培養(yǎng)基中，37℃搖床，150rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘，使質(zhì)粒上相關(guān)抗性基因表達(dá)，菌體復(fù)蘇。
5）吸取 200μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含氯霉 素和質(zhì)粒上相應(yīng)抗生素的 LB 或 SOC 固體平板上，用 無菌涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于 37℃培養(yǎng)箱 里直至液體完全吸收，倒置培養(yǎng) 12~16 小時(shí)。涂布量 應(yīng)根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整，如果轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多，可 取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板，如果預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較少， 可 3000rpm 離心 5 分鐘，吸取部分培養(yǎng)基，懸浮菌體 后涂布在一個(gè)平板上。涂布剩余的菌液在置于 4℃冰 箱中保存，如果第二日轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩余 菌液再涂布在新的平板上。
注意事項(xiàng)：
1）感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存于-70℃冰箱中，不可反復(fù) 凍融，或放置時(shí)間過長(zhǎng)，避免感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率降低。
2）實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，應(yīng)注意無菌條件。
3）實(shí)驗(yàn)過程中，可保留部分連接反應(yīng)液，當(dāng)轉(zhuǎn)化 不成功時(shí)，可重新轉(zhuǎn)化。
