產(chǎn)品名稱：NLS-Cas9(D10A) Nickase
中文名稱：NLS-Cas9(D10A) 內(nèi)切酶
產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格：
| 編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價格 |
| HKE376 | NLS-Cas9(D10A) Nickase | 50μg/盒 | crispr基因編輯（內(nèi)切酶） | 1575 |
產(chǎn)品描述：
CRISPR/Cas9 是細菌和古細菌在長期演化過程中形成的一種適應(yīng)性免疫防御系統(tǒng)，改造后的 II 型 CRISPR/Cas9 系統(tǒng)在基因的定點修飾中展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用潛能。脫靶效應(yīng)是目前 CRISPR/Cas9 技術(shù)應(yīng)用的一個難題，在基因編輯應(yīng)用中，可能會出現(xiàn)難以預(yù)測的后果。
本制品為 spCas9 Nuclease 的一個突變體。Cas9 Nuclease 具有兩個切割活性中心，從而實現(xiàn)在 sgRNA 靶序列特定位點引入 DNA 雙鏈斷裂（DSB）。NLS-Cas9（D10A）Nickase 在 Cas9 Nuclease 基礎(chǔ)上突變其中一個切割活性中心，其能在與 sgRNA 靶序列互補的DNA 鏈上產(chǎn)生切口，從而形成功能性的單鏈斷裂，并且通過在蛋白兩端加了核定位序列(NLS),可把蛋白送到細胞核內(nèi)進行基因組編輯， 配合一對 gRNA 使用，可實現(xiàn) Cas9 Nuclease 相同的基因編輯效果，由于有效的識別序列由 20 bp 增加至 40 bp，可明顯減少意外的脫靶基因修飾，從而顯著提高 CRISPR/Cas9 技術(shù)基因修飾的特異性。
產(chǎn)品特點：純蛋白體系，避免 CRISPR 基因敲除時引入質(zhì)粒或病毒干擾； 可顯著降低脫靶效應(yīng)。
產(chǎn)品用途：
1，基于蛋白與 sgRNA 轉(zhuǎn)染的非病毒載體 CRISPR 基因敲除；
2，基于蛋白與 sgRNA 轉(zhuǎn)染的非病毒載體 CRISPR 基因敲入；
3，sgRNA 剪切靶點 DNA 效率檢測，降低體內(nèi)篩選成本；
4，體外剪切靶 DNA 的特異位點。
應(yīng)用實例：圖例）NLS-Cas9(D10A) Nickase DNA 切割活性檢測：
帶有靶位點的超螺旋 DNA（cccDNA）；
酶切產(chǎn)生切刻后的開環(huán) DNA（ocDNA）；
50 -100 ng 酶可有效切割 cccDNA（>95%）。
保存體系：10mM Tris-HCl，300mM NaCl，0.1mM EDTA，50% Glycerol， PH7.4，25℃。
保存溫度：-20℃保存，或-80℃長期保存。
NLS-Cas9(D10A) Nickase 產(chǎn)品包裝（A包裝）：
| 產(chǎn)品組成 | 體積 |
| NLS-Cas9(D10A) Nickase(0.1 μg/μl) | 500 μL |
| 10×Reaction Buffer | 1 ml |
質(zhì)量保證：經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE 膠檢測僅可見清晰單一的目的條帶，純度達 95%；內(nèi)毒素含量< 0.1EU/μg；qPCR 方法檢測無大腸桿菌基因組殘留；無 RNase、核酸內(nèi)、外切酶污染。
體外切割體系（20μL）：
| Supercoiled DNA | 200 ng |
| sgRNA | 200 ng |
| NLS-Cas9(D10A) Nickase | 50-100 ng |
| 10×Reaction Buffer | 2 μl |
| RNase Free Water | To 20 μl |
37 ℃保溫 1 h、70℃保溫 10 min
注：在反應(yīng)體系中可添加 RNase Inhibitor 至 1U/μl，防止RNase 污染。
相關(guān)產(chǎn)品：
| HKE365 | NLS-Cas9 Nuclease |
| HKE366* | Cas9（D10A）Nickase |
| HKE367** | Cas9（H840A）Nickase |
| HKE368*** | Cas9（D10A, H840A）Nuclease |
| HKE369 | sgRNA In Vitro one-step Transcription Kit |
| HKE370 | sgRNA Screening and Genotype Confirmation Kit |
* 為 Cas9(D10A) Nickase，能在與 sgRNA 靶序列互補的 DNA 鏈上產(chǎn)生切口，從而形成功能性的單鏈斷裂，可以減少意外的脫靶基因修飾。
** 為 Cas9(H840A) Nickase，能在與 sgRNA 靶序列非互補的DNA 鏈上產(chǎn)生切口，從而形成功能性的單鏈斷裂，可以減少意外的脫靶基因修飾。
***為 Cas9（D10A,H840A）Nuclease，具有靶 DNA 結(jié)合活性，但無切割活性，可用于陰性對照等用途。
