產(chǎn)品名稱:NGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit
中文名稱:NGS第二鏈cDNA合成試劑盒
產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格:
編號 | 產(chǎn)品名稱 (點擊名稱進入下單頁面) | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價格 |
HKN422系列 | NGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit | 20次 | 100次 | crispr基因編輯(合成雙鏈cDNA試劑盒) | — |
HKN422A | NGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit | 20次 | 2220 | |
HKN422B | NGS第二鏈cDNA合成試劑盒 | 100次 | 9958 |
產(chǎn)品描述:NGS Second-Strand cDNA Synthesis kit 是一種在合成了 cDNA 第一鏈的基礎上去除 RNA-DNA 雜合鏈中的 RNA 鏈,并合成 cDNA 第二鏈,最終形成雙鏈 cDNA 的試劑盒。主要用于二代測 序(NGS)文庫構建中 cDNA 第二鏈的合成。
產(chǎn)品特點:
1) 本試劑盒包含了進行 cDNA 第二鏈合成所需的各種試劑, 簡便,高效;
2) 合成的雙鏈 cDNA,可以直接用于后續(xù)的常規(guī) PCR、real-time PCR、 cDNA 文庫的構建等。
應用實例:
1、cDNA 第二鏈合成
模板:采用體外轉錄 RNA 為模板逆轉錄得到 810bp cDNA
M:DL2000;
泳道 1:逆轉錄得到 cDNA 第一鏈;
泳道 2:protein cDNA 第二鏈合成試劑盒得到 cDNA 第二鏈;
泳道 3:A 公司 cDNA 第二鏈合成試劑盒得到 cDNA 第二鏈;
2、cDNA 第二鏈合成產(chǎn)物酶切驗證
DNase I 能消化 DNA-RNA 雜合鏈中的 DNA 和 dsDNA,而 RNase H 消化 DNA-RNA 雜合鏈中的 RNA,不消化 dsRNA。
M:DL2000;
泳道 1:cDNA 第一鏈;
泳道 2:cDNA 第一鏈+DNase I;
泳道 3:cDNA 第一鏈+RNaseH;
泳道 4:cDNA 第二鏈;
泳道 5:cDNA 第二鏈+DNase I;
泳道 6:cDNA 第二鏈+ RNaseH;
NGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit 產(chǎn)品包裝:
產(chǎn)品組成 | A包裝 | B包裝 |
NGS Second-Strand DNA Synthesis Enzyme Mix | 100μl | 500μl |
NGS Second-Strand cDNA Synthesis Reaction Buffer | 500μl | 1ml×3 |
RNase Free Water | 1ml×2 | 1ml×6 |
操作方法:
1,在冰上向已完成的 cDNA 第一鏈 20μl 反應體 系中依次加入如下試劑:
產(chǎn)品組成 | 體積 |
First-Strand Synthesis product | 20ul |
Second-Strand cDNA Synthesis Enzyme Mix | 5μl |
Second-Strand cDNA Synthesis Reaction Buffer | 20μl |
RNase free water | 55ul |
2,按上述體系輕輕混勻,隨后離心沉淀液體。
3,16℃孵育 2 小時,熱蓋溫度不超過 40℃。
4,75℃ 熱 失 活 20min ; 或 加 入 5μl 0.5M EDTA(pH8.0)終止反應。
5,后續(xù)使用磁珠純化、酚氯仿抽提、乙醇沉淀 等方法純化合成的雙鏈 cDNA,也可以使用 適應的 DNA 純化試劑盒進行純化。