產(chǎn)品名稱：NGS End Repair/dA-Tailing Module
產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格：
| 編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價格 |
| HKM055A | NGS End Repair/dA-Tailing Module | 24次/盒 | NGS末端修復(fù) | 2325 |
產(chǎn)品描述：
NGS End Repair/dA-Tailing Module 為 illumina 高通量測序 平臺文庫構(gòu)建配套模塊，能夠?qū)Τ曁幚?、化學(xué)處理、酶處理 的片 段化 雙 鏈 DNA或 小 片 段 DNA的 末 端 進(jìn)行 修復(fù) ， 使 DNA 雙鏈形成平末端，并分別在片段化 DNA 兩端添加 5'-P 和 3' 端 dA，所得產(chǎn)物無需純化，直接用于 NGS Fast Ligation Module（貨號：HKM066）進(jìn)行 DNA 片段的 adapter 連接。本 試劑盒采用一步法反應(yīng)流程，省去了多步純化步驟，可對極低 DNA 樣本進(jìn)行高效、快速末端修復(fù)及 dA 尾添加，操作更加簡 便，文庫轉(zhuǎn)化效率更高。
適用范圍：用于雙鏈 DNA 片段的末端修復(fù)及 3'端添加 dA， 適用于 illumina 高通量測序平臺。
適用樣本量：1ng~1μg DNA。
產(chǎn)品特點：
1) 操作簡便，一步完成雙鏈 DNA 片段的末端修復(fù)、dA 添加 反 應(yīng)；
2) 文庫轉(zhuǎn)化率高，DNA 樣本起始量可低至 1ng。
注意事項：
1、開始實驗前，對 DNA 濃度精確定量至關(guān)重要，推薦 DNA 上樣量為 1ng-1μg。DNA可溶解于去離子水、10 mM Tris Buffer EB 或 0.1×TE 等。
2、推薦 DNA 的上樣量指的是片段化后的 dsDNA 的量。推薦 使用 Qubit、Picogreen 或者其他染料法對 DNA 濃度進(jìn)行精確定 量。
3、請確認(rèn) DNA 溶液中不含陽離子及螯合劑，如果 DNA 溶解 于 1×TE 或不確定 DNA 溶液中的 EDTA 濃度，需先對 DNA 進(jìn)行純化后再進(jìn)行片段化反應(yīng)。
保存溫度：所有組分-20℃保存，盡量避免反復(fù)凍融。
NGS End Repair/dA-Tailing Module 產(chǎn)品包裝：
| 產(chǎn)品組成 | A 包裝(24 次) | B 包裝(96 次) |
| End-repair And A-tailing Enzyme Mix | 120μl | 480μl |
| End-repair And A-tailing Reaction Buffer | 100μl | 400μl |
| RNase Free Water | 1ml | 1ml×4 |
操作方法：
1，將 End-repair And A-tailing Reaction Buffer 和 End-repair And A-tailing Enzyme Mix 置于冰上融化， 輕輕顛倒混勻。
2，在 200μl 的 Nuclease-Free 管中按下表配制反應(yīng)體 系，冰上操作，各組分加入后，請輕柔吸打混勻，注 意不要渦旋
| Fragmented DNA | X |
| Endrepair and A-tailling Reaction Buffer | 4μl |
| RNase Free Water Up | to 40μl |
3，向步驟 2 中的 Nuclease-Free 管中加入 5μl End-repair And A-tailing Enzyme Mix，輕柔吹打 6-8 次， 不要渦旋。
注：此過程需一直處于冰浴中進(jìn)行。
4，將配置好反應(yīng)體系的 Nuclease-Free 管放入 4℃預(yù) 冷的 PCR 儀中，并開啟以下 PCR 程序：
| 熱蓋 105℃ | on |
| 20℃ | 15min |
| 72℃ | 15min |
| 4℃ | Hold |
5，當(dāng)反應(yīng)程序結(jié)束后，將 Nuclease-Free 管從 PCR 儀中取出并置冰上。
6，立即進(jìn)入接頭連接步驟，為保證連接效率，推薦 使用 NGS Fast Ligation Module（HKM066）。
