實驗室檢測沙門氏菌的關(guān)鍵控制要點分享
發(fā)布時間：2022-04-22 瀏覽次數(shù)：1834
實驗室檢測沙門氏菌的關(guān)鍵控制要點分享
沙門氏菌的檢測在國內(nèi)的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中幾乎全部都有所涉及，《GB 29921-2021 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中致病菌限量》標(biāo)準(zhǔn)在2021年11月實施，國內(nèi)預(yù)包裝產(chǎn)品的致病菌項目中的沙門氏菌檢驗項目越來越嚴(yán)格，現(xiàn)在需要檢驗5份樣品，每份都不得檢出才能報告合格結(jié)果。這一限量標(biāo)準(zhǔn)的變化也增加了食品生產(chǎn)企業(yè)對生產(chǎn)環(huán)節(jié)的要求，同樣也增加了一線檢驗人員的工作量。
現(xiàn)在市面上雖然已經(jīng)有很多沙門氏菌的快速檢測方法，但是對于國內(nèi)大部分企業(yè)或者第三方檢測機構(gòu)來說，用的最多的應(yīng)該還是《GB 4789.4-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 沙門氏菌檢驗》這一傳統(tǒng)的方法。下面就跟大家交流一下我們在日常檢測沙門氏菌需要注意的一些問題，如果有什么地方說得不對的也請大家批評指正。
一、硬件方面
沙門氏菌的檢測要在二級生物安全實驗室（需要配備生物安全柜）中進行，特別是有檢出疑似菌進行生化鑒定以及血清學(xué)鑒定的時候，切記一定要在生物安全柜中進行操作，并做好相應(yīng)的使用記錄。
二、培養(yǎng)基、生化試劑及血清方面
目前食品微生物檢測所涉及的培養(yǎng)基和生化試劑等都需要根據(jù)《GB4789.28食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》進行質(zhì)量控制及驗收。沙門氏菌檢測中所用到的BS平板、XLD平板、沙門顯色平板、TSI等培養(yǎng)基，還有生化鑒定試劑盒以及O多價診斷血清A-F，H多價診斷血清都需要使用標(biāo)準(zhǔn)菌株進行質(zhì)量控制，以保證實驗室最終檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，這里因為涉及到標(biāo)準(zhǔn)菌株的使用，需要在生物安全柜中操作，相應(yīng)的記錄也要有。
另外，用于二次選擇增菌的TTB和SC培養(yǎng)基，以及用于選擇分離的BS、XLD培養(yǎng)基建議現(xiàn)配現(xiàn)用，需要注意的是配制的時候只需要加熱煮沸即可，這里建議盛裝的容器（燒杯或三角燒瓶等）預(yù)先經(jīng)過高壓濕熱滅菌，以減少污染雜菌對檢測過程的干擾。還有TTB配制所需的碘液一定要避光保存。
三、檢測過程方面
1、前增菌和二次增菌不可少
前增菌是為了使受傷菌得到修復(fù)。另外食品中的沙門氏菌含量一般都很少，而且會有多種細菌同時存在的情況。所以用前增菌和增菌分別進行篩選和培養(yǎng)，以便增加后期的分離培養(yǎng)的檢出率。
2、要防止干擾及誤判，盡可能多地挑取可疑菌
一般實驗室都會挑取選擇性培養(yǎng)基上典型的沙門氏菌特征菌落如黑色中央的菌落做后續(xù)鑒定，而未選取非典型菌落。通常的沙門氏菌在HE瓊脂（HE）或木糖賴氨酸瓊脂(XLD)上不發(fā)酵乳糖（不產(chǎn)生黃色菌落），而亞利桑那沙門氏菌具有緩慢發(fā)酵乳糖的特性，如實驗人員缺乏足夠經(jīng)驗，可能忽略黃色菌落，導(dǎo)致漏檢。
還有，如果檢品中的污染菌比較復(fù)雜，也要盡量多挑取可疑菌進行生化鑒定以及血清學(xué)鑒定。如弗氏枸櫞酸桿菌可在24h 時形成具有沙門氏菌典型特征的菌落，生化反應(yīng)與沙門氏菌相似，并且與沙門氏菌診斷血清有輕微的交叉反應(yīng)，可能導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性結(jié)果；粘質(zhì)沙雷氏菌在科瑪嘉沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上的顏色與典型的沙門氏菌的紫紅色很接近。
實驗人員切記不可只看選擇性培養(yǎng)基上的特征和TSI 特征符合就報結(jié)果，沒有把關(guān)鍵的生化反應(yīng)（如賴氨酸脫羧酶和血清型試驗A-F-O 多價）完成。這些都可能導(dǎo)致假陽性的結(jié)果。
3、TSI接種注意事項
實驗的時候需要先劃線再穿刺，如果先穿刺再劃線，由于菌含量太高，如果產(chǎn)H2S變黑，底層產(chǎn)酸現(xiàn)象的觀察會受影響，還有就是，如果產(chǎn)氣比較多的話，培養(yǎng)基會被頂出老高，嚴(yán)重的話還有可能會頂開試管塞。
4、血清學(xué)鑒定注意事項
血清學(xué)鑒定的時候一定要用生理鹽水做對照，以免出現(xiàn)假陽性的結(jié)果。
四、結(jié)果判定方面
實驗人員一定要綜合生化試驗以及血清學(xué)鑒定的結(jié)果才能最終判定檢出還是未檢出沙門氏菌。
