關(guān)于血清的那些事兒(一)：血清中的沉淀
發(fā)布時(shí)間：2022-07-06 瀏覽次數(shù)：1890
與細(xì)胞為伴的你，是否為血清中的沉淀所困擾？血清的沉淀是什么？哪些操作導(dǎo)致沉淀增多？沉淀該如何去除？血清究竟該如何儲(chǔ)存，如何解凍？你想要的都在這里！
什么是血清？
血清是血液凝固析出的淡黃色透明液體，是血漿去除纖維蛋白后的混合物，主要成分包括蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、維生素和多肽(如生長(zhǎng)因子、胰島素、促生長(zhǎng)激素)等。血清是細(xì)胞培養(yǎng)過程中重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，同時(shí)也對(duì)細(xì)胞起到一定的保護(hù)作用。
血清中的沉淀是什么？
用于細(xì)胞培養(yǎng)的各種血清產(chǎn)品(胎牛血清、新生牛血清和馬血清等)中都存在各種類型的沉淀。除了膽固醇和一些蛋白沉淀之外，血清中也會(huì)含有纖維蛋白和磷酸鈣。雖然沉淀可引起初始問題，但在細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用方面， 沉淀一般不會(huì)對(duì)血清的性能產(chǎn)生影響。
纖維蛋白
纖維蛋白肉眼可見的較大物質(zhì)(可達(dá) 1-2 mm)。血清是在低溫條件下收集并迅速加工處理，導(dǎo)致一些纖維蛋白原(纖維蛋白的前身)仍存在于溶液中。雖然過濾去除了絕大部分的纖維蛋白，但解凍過程中，纖維蛋白原會(huì)再次轉(zhuǎn)化成纖維蛋白析出，形成沉淀。
磷酸鈣
磷酸鈣一種常見的沉淀物，表現(xiàn)為云狀。通過倒置顯微鏡觀察，會(huì)發(fā)現(xiàn)許多小黑點(diǎn)。由于布朗運(yùn)動(dòng)，這些黑點(diǎn)可自由移動(dòng)，因此常被誤認(rèn)為是微生物污染。
少量的沉淀是血清解凍過程中的正常現(xiàn)象，過于澄清的血清并不代表更高的質(zhì)量，也可能是“預(yù)老化”(加工過程中反覆凍融盡可能的去除纖維蛋白原)的結(jié)果。雖然血清中的沉淀很難預(yù)測(cè)和阻止，但合理正確的儲(chǔ)存和使用方法可以降低血清中沉淀的析出，同時(shí)也可采取簡(jiǎn)單的方式去除沉淀物。
沉淀增多的原因
◆ 血清熱滅活；
◆ 37 ℃水浴保溫；
◆ 頻繁的解凍與凍存操作；
◆ 解凍過程中未混合；
◆ 經(jīng) γ-輻射；
◆ 2-8 ℃ 長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存；
◆ 在自動(dòng)解凍的冰箱中儲(chǔ)存。
去除沉淀的方法
如果血清中含有大量的沉淀，我們不建議直接過濾血清。若去除這些絮狀沉淀物，可將血清分裝至無菌離心管中，以 400 g 稍微離心，上清液直接加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。
血清解凍方法
1. 將凍存的血清移到 2-8 ℃ 的冰箱中，過夜處理；
2. 將血清移至 37 ℃ 水浴中，間歇性搖晃混勻底部的溶解物，直至全部溶解。
① 溫和的升溫過程可有效減少沉淀的產(chǎn)生，不推薦直接高溫解凍血清；
② 解凍之后的血清不要長(zhǎng)時(shí)間放置在 37 ℃ 下；
③ 若血清沒有混勻且放置于高于 40 ℃ 的水浴中，底部的蛋白會(huì)變性形成沉淀；
④ 在解凍過程中，需不斷的搖晃混合以阻止形成梯度及沉淀；
⑤ 在解凍或長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存之后，血清中會(huì)出現(xiàn)渾濁物和絮狀物；
⑥ 反覆凍融會(huì)造成血清的沉淀增多，給后續(xù)處理帶來麻煩，我們建議血清的解凍/凍存次數(shù)越少越好。
血清的存儲(chǔ)方法及注意事項(xiàng)
血清應(yīng)當(dāng)儲(chǔ)存在-10 ℃ 或更低溫度條件下
儲(chǔ)存在-80℃ 下的血清，雖然在性能方面也沒有任何變化，但我們建議不要在該條件下儲(chǔ)存，一方面 -80℃ 會(huì)增大血清包裝瓶破裂的風(fēng)險(xiǎn)，另一方面解凍時(shí)巨大的溫度變化會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生更多的沉淀。血清一旦解凍，可在 2-8 ℃條件下儲(chǔ)存 6 周。如果解凍之后的血清儲(chǔ)存時(shí)間需要大于 6 周，建議分裝成合適的體積并重新凍存。
