關于細胞培養(yǎng)基顏色變化的小知識
發(fā)布時間：2022-07-28 瀏覽次數：8364
傳統細胞基礎培養(yǎng)基是紅色的，因為其中含有酚紅，弱堿性的酚紅呈紅色，作為細胞培養(yǎng)pH指示。同時，由于緩沖體系的原因，要維持弱堿性的pH值需要使用二氧化碳培養(yǎng)箱。
是否所有的細胞培養(yǎng)基均適用同樣的CO2濃度？其實不然，CO2濃度的選擇取決于NaHCO3濃度。CO2和溶液中的-HCO3形成緩沖體系，使得整個培養(yǎng)體系的pH值維持在弱堿性（7左右），這也是哺乳動物細胞生長的最適pH值。當培養(yǎng)基長時間暴露在空氣中是，-HCO3會迅速分解，pH值快速升高，視覺觀感上即是從紅變紫。當再次將培養(yǎng)基放到細胞培養(yǎng)箱中后，在CO2的作用下，又會緩慢地從紫變回紅色。
左圖為與空氣接觸時間過長，pH升高后顏色；右圖為正常培養(yǎng)基顏色
不同的細胞培養(yǎng)基的NaHCO3濃度不一樣，使用不用的細胞培養(yǎng)基應選擇與之對應的CO2濃度：
NaHCO3 (g/L) 濃度<1.5時，所需CO2濃度為4%；
NaHCO3 (g/L) 濃度處于1.5-2.2時，所需CO2濃度為5%；
NaHCO3 (g/L) 濃度處于2.2-3.4時，所需CO2濃度為7%；
NaHCO3 (g/L) >3.5時，所需CO2濃度為10%。
隨著細胞不斷生長，pH值逐漸不斷下降（由于乳酸的代謝性積累），培養(yǎng)基會變成黃色。當我們發(fā)現培養(yǎng)過程中培養(yǎng)液的pH發(fā)生不正常地變化時，我們需要這樣做：
1、確定是否使用不當的二氧化碳濃度：依據培養(yǎng)基中的碳酸氫鈉濃度來增加或降低培養(yǎng)箱中的二氧化碳百分比。對于2.0至3.7 g/L的碳酸氫鈉，分別使用5-10%的二氧化碳濃度?；驌Q用不依賴二氧化碳的培養(yǎng)基。
2、確定是否組織培養(yǎng)瓶蓋子過緊：將蓋子擰松1/4圈。
3、確定是否碳酸氫鹽緩沖不充分：加入HEPES緩沖液，使最終濃度達到10-25 mM。
4、確定是否培養(yǎng)基中含有錯誤的鹽分：請在CO2條件下使用Earle's鹽培養(yǎng)基，在大氣環(huán)境下使用Hanks'鹽培養(yǎng)基。
5、確定是否細菌，酵母或真菌污染：丟棄培養(yǎng)物及培養(yǎng)基，嘗試對培養(yǎng)物進行去污染。
