培養(yǎng)基主要營養(yǎng)類原材料生物學(xué)檢驗(yàn)
發(fā)布時(shí)間：2022-09-05 瀏覽次數(shù)：2555
生物學(xué)指標(biāo)檢驗(yàn)是培養(yǎng)基營養(yǎng)類原材料最主要和最關(guān)鍵的指標(biāo)，直接關(guān)系培養(yǎng)基的質(zhì)量好壞。原材料生產(chǎn)廠家和培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家都應(yīng)重點(diǎn)進(jìn)行檢測。主要檢測的指標(biāo)有可發(fā)酵糖試驗(yàn)、H?S試驗(yàn)、靛基質(zhì)(吲哚)試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、生長試驗(yàn)、色素試驗(yàn)、菌落總數(shù)檢測和耐熱芽孢桿菌總數(shù)等。
1. 可發(fā)酵糖試驗(yàn)
稱取樣品2.0g、氯化鈉0.5g、酚紅0.002g、蒸餾水或去離子水100mL，配制成溶液，調(diào)節(jié)其pH值至7. 2~7.4，分裝于含有小倒管的試管中，每管6. 0mL，115°C高壓滅菌15min后，接種大腸埃希氏菌和鼠傷寒沙門氏菌18h~24h的新鮮培養(yǎng)物，35°C±2°C培養(yǎng)18h~24h，觀察結(jié)果。陰性結(jié)果：培養(yǎng)基顏色為橙紅色或紅色，不產(chǎn)氣。
陽性結(jié)果：培養(yǎng)基顏色變成黃色，產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣。
2. H?S 試驗(yàn)
稱取樣品1. 0g、氯化鈉0.5g、蒸餾水或去離子水100mL，配制成溶液，調(diào)節(jié)其pH值至7.2~7.6，分裝于試管中，每管6.0mL，121°C高壓滅菌15min后，接種鼠傷寒沙門氏菌的18h~24h的新鮮培養(yǎng)物，將醋酸鉛(PbAc)試紙插入試管中，試紙下端距離液面2cm~3cm，蓋好試管蓋30°C~35°C培養(yǎng)24h~48h，觀察結(jié)果。
陽性結(jié)果：醋酸鉛試紙條變黑，且黑色域不得小于0.5cm。陰性結(jié)果：醋酸鉛試紙條不變黑或黑色域小于0.5cm。
3. 靛基質(zhì)(吲哚)試驗(yàn)
稱取樣品2.0g、氯化鈉0.5g、蒸餾水或去離子水100mL，配制成溶液，調(diào)節(jié)其pH值至7.2~7.6，分裝于試管中，每管6.0mL，121°C高壓滅菌15min；高壓滅菌后，分別接種大腸埃希氏菌、鼠傷寒沙門氏菌的18h~24h 的新鮮培養(yǎng)物，35°C±2°C培養(yǎng)18h~24h。觀察結(jié)果時(shí)每管加人2~4滴靛基質(zhì)試劑。10s內(nèi)液面上出現(xiàn)玫瑰紅色環(huán)者為陽性，出現(xiàn)黃色者為陰性。大腸埃希氏菌應(yīng)為陽性，鼠傷寒沙門氏菌呈陰性。
4. V-P試驗(yàn)
稱取樣品0.7g、葡萄糖0.5g、氯化鈉0.5g，加100mL的蒸餾水或去離子水配制成溶液，調(diào)節(jié)其pH值7.2~7.4，以每管6.0mL分裝，115°C高壓滅菌15min后，分別接種產(chǎn)氣腸桿菌、大腸埃希氏菌的18h~24h新鮮培養(yǎng)物，35°C±2°C培養(yǎng)18h~24h。觀察結(jié)果時(shí)，除去試管帽，依次加入VP試劑甲、乙液，甲液6滴，乙液2滴，混合均勻，放置36°C培養(yǎng)箱孵育30min，溶液變紅色為陽性，不變色為陰性。產(chǎn)氣腸桿菌呈陽性反應(yīng)，大腸埃希氏菌呈陰性反應(yīng)。
5. 色素試驗(yàn)
稱取樣品2. 0g、氯化鈉0.5g、瓊脂1. 2g，加入100mL的蒸餾水或去離子水中，加熱完全溶解，調(diào)節(jié)pH值7.2~7.4，121°C高壓滅菌15min。高壓滅菌后，待溫度降到50°C左右時(shí)傾注平板，充分凝固后，四區(qū)劃線接種金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞桿菌的新鮮培養(yǎng)物，35°C±2°C培養(yǎng)18h~24h，觀察結(jié)果。應(yīng)生長良好，金黃色葡萄球菌有黃色色素生成，銅綠假單胞菌有綠色色素生成。
6. 生長試驗(yàn)
(1)質(zhì)控菌株：大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、鼠傷寒沙門氏菌、銅綠假單胞菌、福氏志賀氏菌、乙型溶血性鏈球菌。
(2)液體培養(yǎng)基生長試驗(yàn)(九管法)
1)培養(yǎng)基配制：2.0g樣品、0.5g氯化鈉，加人到100mL的蒸餾水或去離子水中，加熱完全溶解，調(diào)節(jié)pH值至7.2~7. 4，分裝試管，每管9mL，121°C高壓滅菌15min后，冷卻備用。
2)操作方法：將質(zhì)控菌株18h~24h新鮮培養(yǎng)物用無菌水制成10?標(biāo)準(zhǔn)菌懸液(與標(biāo)準(zhǔn)比濁管比較)，10倍梯度稀釋至10??，依次接種10??、10??、10??菌懸液于液體培養(yǎng)基管中，每個(gè)濃度重復(fù)3管，35°C±2°C培養(yǎng)18h~24h。同時(shí)用合格品做對照品，樣品應(yīng)與對照品結(jié)果基本一樣或優(yōu)于對照品時(shí)，判為合格。
(3)固體培養(yǎng)基生長試驗(yàn)(平皿定量滴加法)
1)培養(yǎng)基配制：2.0g樣品、0.5g氯化鈉、1.2g瓊脂，加入到100mL的蒸餾水或去離子水中，加熱完全溶解，調(diào)節(jié)pH值7.2~7.4，121°C高壓滅菌15min后，倒平板，待充分凝固后并倒置于37°C培養(yǎng)箱1h~2h后，備用。
2)操作方法：制備好的固體培養(yǎng)基，用記號(hào)筆成90°C交叉劃線分成四份，依次滴加10mL濃度為10?CFU/mL、10?CFU/mL、10?CFU/mL、10?CFU/mL的質(zhì)控菌株菌液(見圖4-5-1)，輕輕搖動(dòng)，待菌液吸干后倒置于35°C±2°C培養(yǎng)18h~24h。同時(shí)用合格品做對照品，樣品應(yīng)與對照品結(jié)果基本一樣或優(yōu)于對照品時(shí)，判為合格。
(4)生長試驗(yàn)結(jié)果評判
1)九管法和平皿定量滴加法都合格時(shí)，此原材料適合絕大部分培養(yǎng)基使用。
2)九管法合格，而平皿定量滴加法不合格時(shí)，此原材料適合于大部分液體培養(yǎng)基使用。
3)九管法不合格，而平皿定量滴加法合格時(shí)，此原材料適合于大部分含瓊脂培養(yǎng)基使用。
4)兩種都不合格時(shí)，此原材料為不合格，最好不要用于配制培養(yǎng)基。
7. 菌落總數(shù)檢測
稱取25g樣品溶解于225mL無菌蒸餾水或去離子水后，制成10倍系列稀釋液，選取兩三個(gè)適宜稀釋度，吸取1mL樣品液涂布于平板計(jì)數(shù)瓊脂(PCA)平板上，36°C±1°C培養(yǎng)48h±2h計(jì)數(shù)結(jié)果，需做2個(gè)重復(fù)。
8. 耐熱芽孢桿菌檢測
稱取25g樣品溶解于225mL無菌蒸餾水或去離子水后，制成10倍系列稀釋液，選取兩三個(gè)適宜稀釋度，吸取1mL樣品液涂布于葡萄糖胰蛋白胨瓊脂平板上，55°C±1°C培養(yǎng)48h±2h計(jì)數(shù)結(jié)果，需做2個(gè)重復(fù)。
主要營養(yǎng)類原材料的生物學(xué)檢驗(yàn)指標(biāo)見表4-5-2。
