產(chǎn)品名稱：嗜肺軍團菌核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
英文名稱：PCR Detection Kit for Legionella pneumophila (Fluorescent Probe Assay)
產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格：
| 編號 | 規(guī)格 |
| FZ015BF2 | 48 測試/盒 |
產(chǎn)品簡介：本試劑盒適用于飲用水、非飲用水、公共場所環(huán)境樣本中嗜肺軍團菌的檢測。
檢測原理：基于Real Time PCR技術(shù)，針對嗜肺軍團菌特異性基因mip設(shè)計引物和熒光探針并優(yōu)化反應(yīng)所需試劑組分，加入待檢樣品核酸即可進行擴增反應(yīng)。在擴增過程中，熒光探針與目的基因片段結(jié)合，可被Taq酶分解并產(chǎn)生熒光信號，此時熒光定量PCR儀可識別該熒光信號，同時根據(jù)其強弱變化繪制出相應(yīng)的實時擴增曲線，進而判定嗜肺軍團菌是否檢出。
嗜肺軍團菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)產(chǎn)品組分：
儲存條件與保質(zhì)期：-20℃儲存，有效期為12個月，避免反復(fù)凍融。
靈敏度：最低檢驗限達到 100 CFU/Test
所需其他材料和適用儀器：熒光定量 PCR 儀（具有能夠檢測 FAM 標(biāo)記的熒光通道）、高速離心機、移液器、移液槍頭及離心管等。
嗜肺軍團菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)使用指南：
1，樣品前處理
1) 樣品增菌液模板 DNA 的制備：
a) 取樣過程參考國標(biāo)《GB/T 18204.3-2013 公共場所衛(wèi)生檢驗方法 第3部分：空氣微生物》，或各實驗室自行建立的方法。取樣后可接種到100 mL GVPC液體培養(yǎng)基中，放置二氧化碳培養(yǎng)箱36 ℃±1 ℃培養(yǎng)，增菌18~24 h；
b) 吸增菌液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無菌離心管中，6000 r/min離心5 min，完全去除上清；
c) 加入30 μL裂解液，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱10 min；
d) 12000 r/min離心15 min，上清即為粗提的DNA，可轉(zhuǎn)移至0.2 mL無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。
2) 可疑菌落模板 DNA 的制備：挑取可疑菌落，充分懸浮于預(yù)先加有30 μL裂解液的無菌離心管中，后按照上述步驟c)、d)操作。
2, 加樣、反應(yīng)
1) 按照需求取n個PCR反應(yīng)管（n=待檢測樣品數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照），從試劑盒中取出預(yù)混液，充分融化，渦旋振蕩后短暫離心，向以上每個PCR管中加入20 μL預(yù)混液。
2) 向上述n個反應(yīng)管中分別按順序加入陰性對照、待測樣品DNA、陽性對照各5 μL，加樣后立刻蓋緊管蓋，短暫離心，立即進行PCR擴增反應(yīng)。
3) PCR反應(yīng)體系為25 μL，設(shè)置FAM檢測通道讀取，在反應(yīng)階段2中60℃時收集熒光信號，具體程序如下：
| 反應(yīng)階段 | 溫度 | 時間 | 信號收集 | 循環(huán)數(shù) |
| 1 | 95°C | 30 sec | 1 | |
| 2 | 95°C | 5 sec | } 40 | |
| 60°C | 30 sec | ? |
3, 結(jié)果：一般情況下，可通過軟件自動設(shè)定的基線、閾值等直接讀取檢測結(jié)果。如需調(diào)整，可根據(jù)所使用儀器的自身情況（如噪聲等）以及選取的不同熒光通道進行調(diào)整。
1) 質(zhì)量控制：陰性對照未出現(xiàn)明顯的S型擴增曲線或Ct值＞37，陽性對照出現(xiàn)S型擴增曲線且其Ct值＜30。若陰陽性對照不同時滿足上述條件，則本次檢測結(jié)果無效，應(yīng)重新檢測或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。
2) 結(jié)果判讀：（根據(jù)反應(yīng)所得Ct值判讀，具體見下表：）
| Ct值 | 結(jié)果判讀 |
| ≤35 | 嗜肺軍團菌陽性。 |
| 35~37 | 建議重新檢測，若結(jié)果Ct≥37，則嗜肺軍團菌陰性，反之則為嗜肺軍團菌陽性。 |
| ≥37 | 嗜肺軍團菌陰性。 |
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