GB4789.2-2022新標(biāo)準(zhǔn)常見問題解答
發(fā)布時間：2022-12-23 瀏覽次數(shù)：2562
來源：六扇門Study
GB4789.2-2022自8月發(fā)布后，標(biāo)準(zhǔn)的使用者們都在研究領(lǐng)會新標(biāo)準(zhǔn)的變化，許多培訓(xùn)機構(gòu)、廠商也都舉辦了系列培訓(xùn)班。這期間，也冒出許多問題哦，小六收集了一些在線培訓(xùn)過程大家提出的問題，匯總了20個比較常見的，并給出參考答案，供大家參考哈。
有回答不到位的，歡迎小伙伴們補充及指正哈！有新的問題，也歡迎留言提出！
問題1：GB4789.2培養(yǎng)條款中，規(guī)定水產(chǎn)品30°C±1°C培養(yǎng)72ｈ±3ｈ，這里的水產(chǎn)品具體指什么？有具體的文件或者標(biāo)準(zhǔn)條款支持嗎？
答：水產(chǎn)品為帶有原生菌群，未通過加工工藝的水產(chǎn)品。凡經(jīng)過腌制，熟制等加工的屬于水產(chǎn)制品，不屬于水產(chǎn)品，具體可參照GB2760-2014的分類系統(tǒng)。
問題2：我們實際工作中，覆蓋一層培養(yǎng)基后還是會有蔓延整皿的情況，新國標(biāo)刪除了“報告菌落蔓延”的條款，這種情況我們?nèi)绾翁幚砟兀?/span>
答：可以數(shù)不蔓延的一半或者四分之一，報告時如25*2/4，代表計數(shù)的一半或四分之一平板。
問題3：如果覆蓋4mL平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基后還是沒有辦法抑制某些菌蔓延的話該怎么處理？
答：沒更好的辦法處理，這類情況一般都是樣本中含有芽胞菌，就是蔓延菌落。計數(shù)可參考問題2。
問題4：粘稠的液體樣品用天平稱取還是用吸管吸取比較好？
答：看產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)要求，無要求建議天平（精確小數(shù)點后一位即可）稱取，更準(zhǔn)確，以CFU/g報告檢測結(jié)果。
擴展一下：國際上，一般粘度大于牛奶的按照固體樣本處理。
問題5：液體樣品直接檢測原液呢，是不是就不符合檢驗步驟了呢？
答：符合，標(biāo)準(zhǔn)中指出液體可以從原液開始，這樣更接近真實結(jié)果。
問題6：傾注培養(yǎng)基，瓊脂溫度一直是控制在手能接受的溫度，這樣做可以嗎？
答：首先，建議水浴鍋保溫，水浴鍋設(shè)定在48℃，水溫恒定即可；其次，采用虎口能接受的溫度，而不是手。
問題7：一些樣品傾注后，平板底部有白色沉淀和顆粒存在，長菌后不好鑒別結(jié)果，有沒有好的方法判斷？
答：一種方法：建議使用帶過濾功能的均質(zhì)袋，盡可能的過濾掉殘渣；另一種方法，可以使用測試片對樣本進行檢測，計數(shù)紅色菌落，白色顆粒殘渣不顯色。
問題8：如果第一稀釋度兩個皿都沒有長，第二稀釋度確長了菌，這是什么原因？
答：一種情況是樣本中可能存在抑菌成分，建議多做2個稀釋梯度，保障結(jié)果準(zhǔn)確性。
問題9：那同一個稀釋度一個平板在是計數(shù)范圍內(nèi)，另一個平板不在范圍內(nèi)，還是報告同一稀釋度的兩個平板的平均值嗎？
答：都可以 ，實驗室自己規(guī)定，建議取平均值更貼近真實值。
問題10：有抑菌成分的產(chǎn)品，越稀釋越有菌，那怎么處理或者重新做樣呢？
答：不會一直越稀釋越有菌的，從梯度正常的稀釋度開始計數(shù)即可。
問題11：10稀釋度的兩個平板分別長了2和3個菌落，最后結(jié)果是報告25還是30？
答：25，建議看看標(biāo)準(zhǔn)中菌落計數(shù)案例。
問題12：兩塊平行板的菌落數(shù)目偏差要求是多少？
答：沒有具體要求，目測偏差太大，會認為均質(zhì)有問題。
問題13：測試片和平板傾注法檢測結(jié)果差異大，取決那個結(jié)果判定？
答：建議以平板傾注法檢測結(jié)果為準(zhǔn)，不同品牌的測試片依然會受樣本適用范圍的影響。
問題14：請問增加了測試片法 還需要做方法驗證嗎？
答：首先，關(guān)于方法驗證（Validation）如果廠家提供了充分的驗證報告，直接采納驗證報告的結(jié)果即可，原則上不需要再進行系統(tǒng)化的驗證，可以選擇1-2個基質(zhì)進行比對驗證。其次，實驗室需要做的是方法確認（Verification），如：使用定量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)開展實驗確認或者通過其他實驗室質(zhì)控手段證明。
問題15：所選擇的測試片，主要營養(yǎng)成分與平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基成分配方一致，是什么意思？
答：主要營養(yǎng)成分一致即符合，主要成分包括：胰蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖，至于其他成分如顯色劑、冷凝膠等各品牌配方可能會有差異。
問題16：之前檢測樣本，采用平板法和測試片法比對，測試片檢測結(jié)果偏低，為什么？
答：一種情況，可能選擇測試片生長率偏低，建議按照GB4789.28做好驗收；另一種情況，平板法中樣品的細小殘渣計數(shù)時會被誤當(dāng)做是菌落計數(shù)，而這些細小樣本殘渣在測試片上是不顯色的。
問題17：平板法和測試片偏差多少屬于符合？
答：可參照ISO16140-2，要求：由差值計算的β容忍區(qū)間在±0.5log之內(nèi)。
問題18：水化后的快速菌落測試片放置多長時間后在進行劃線會比較好？我們按照GB4789.28進行驗收的時候用菌液進行劃線培養(yǎng)基容易粘在接種環(huán)上？
答：如果參照附錄E驗收，建議水化至少1小時以上，8小時以內(nèi)。大家也可參照附錄D選擇參比TSA培養(yǎng)基，PR值PR≥0.7。
問題19：CNAS和CMA變更 是否需要做方法確認？
答：涉及到技術(shù)參數(shù)的需要做方法確認（人、機、料、法、環(huán)），如使用測試片。
問題20：如果不使用測試片， CNAS做方法變更需要做這部分確認實驗嗎？
答：如果不使用測試片，可以不做方法證實及實驗確認，在填寫變更申請表時，表格有一個特定的條款，在里面填寫不用測試片即可。
