滅菌后小倒管內(nèi)留有氣泡原因及解決辦法！
發(fā)布時間：2023-05-09 瀏覽次數(shù)：914
大腸菌群、大腸桿菌檢測時，所用培養(yǎng)基LST、BGLB、EC肉湯等這些需要用小倒管（杜氏管）考察產(chǎn)氣的培養(yǎng)基，滅菌后，偶爾會有小氣泡留在小倒管內(nèi)，導(dǎo)致培養(yǎng)基不能使用。重復(fù)滅菌不僅費時，更重要的是會破壞培養(yǎng)基的有效成分。為了避免這類問題的發(fā)生，根據(jù)實驗經(jīng)驗，做出以下幾種可能原因分析：
原因一：高溫高壓滅菌鍋工作壓力不夠，使氣體不能完全排出。
高壓鍋在滅菌過程中產(chǎn)生的最大壓力不夠，不能將小倒管內(nèi)的氣體擠出，導(dǎo)致滅菌后任留有小氣泡。此外，高溫高壓滅菌鍋若是溫度上升緩慢或者達(dá)不到滅菌溫度，也會出現(xiàn)類似現(xiàn)象。
解決辦法：使用檢查滅菌效果的用品－壓力蒸汽滅菌指示卡，對高溫高壓滅菌鍋的滅菌情況進(jìn)行監(jiān)測。
原因二：試管塞塞得太緊。
在滅菌時，試管塞塞得太緊（有些硅膠塞與試管不配套）會導(dǎo)致試管內(nèi)壓力與滅菌鍋內(nèi)壓力不一致。當(dāng)滅菌鍋升溫升壓時，鍋內(nèi)壓力會大于試管內(nèi)壓力，試管內(nèi)壓力不夠，不能將小倒管內(nèi)氣體排盡，就留有氣泡；當(dāng)滅菌鍋降溫降壓時，鍋內(nèi)壓力小于管內(nèi)壓力，可能會使試管塞和培養(yǎng)基崩出，培養(yǎng)基報廢。
解決辦法：改用塑料帽、不銹鋼管帽，或者與試管相匹配的硅膠塞。
原因三：小倒管口太小。
小倒管在加熱加壓后，一方面液體培養(yǎng)基要進(jìn)入小倒管，另一方面小倒管內(nèi)部的空氣要被排出，如果小倒管管口太小，液體不容易進(jìn)去，里面的空氣不容易被排出，就會導(dǎo)致有小氣泡生成。
解決辦法：改用開口比較大的倒管。
原因四：培養(yǎng)基質(zhì)量引起。
由培養(yǎng)基質(zhì)量引起的氣體不能排盡或培養(yǎng)基含有高溫高壓分解產(chǎn)氣的成分。滅菌時用水做培養(yǎng)基組的對照試驗，若培養(yǎng)基組有氣泡，而對照組沒有氣泡，可確定是有此原因引起。
解決辦法：改用其它培養(yǎng)基。
原因五：過早打開滅菌鍋。
當(dāng)滅菌鍋壓力表示數(shù)為0而溫度表示數(shù)還高與室溫時，不要打開滅菌鍋。因為打開鍋蓋瞬間，鍋內(nèi)大量熱量散出，溫度突然降低，試管內(nèi)溫度也隨著降低，導(dǎo)致管內(nèi)氣壓減小，沸點降低，部分水會汽化留在小導(dǎo)管內(nèi)。
解決辦法：等滅菌鍋內(nèi)氣壓和溫度都降到與室溫一致或相差不大時再打開滅菌鍋。
以上提供幾種可能形成氣泡的主要原因，還有幾點建議：
1.可以在高壓鍋壓力降下來后，溫度不太高的時候?qū)⑴囵B(yǎng)基從鍋中拿出，迅速放在冷水中，急冷，注意要使冷水高度超過試管中液面高度。利用熱脹冷縮的原理，可以使小倒管中氣泡排出。
2.若使用非全自動高溫高壓滅菌鍋（此類鍋一般需要在100℃手動關(guān)閉放氣閥），則不要在鍋剛達(dá)到100℃時就關(guān)閉放氣閥，可以讓高壓鍋在100℃時多排一會兒熱氣，這樣有助于小倒管中氣體排出。
此外，盡量不要采用將滅菌后的試管顛倒或大角度傾斜的方式，使小倒管內(nèi)氣體排出。此種方法可能會導(dǎo)致培養(yǎng)基通過試管口或試管塞受到污染，或者導(dǎo)致試管內(nèi)液體流出。
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