幾種活菌計(jì)數(shù)法的比較和應(yīng)用
發(fā)布時(shí)間：2023-11-01 瀏覽次數(shù)：8087
活菌計(jì)數(shù)法又稱(chēng)間接計(jì)數(shù)法。直接計(jì)數(shù)法測(cè)定到的是死、活細(xì)胞總數(shù)，間接計(jì)數(shù)法測(cè)得的僅是活菌數(shù)。這類(lèi)方法所得的數(shù)值往往比直接計(jì)數(shù)法測(cè)得的數(shù)值小。活菌計(jì)數(shù)法一般有平板菌落計(jì)數(shù)法、MPN法、薄膜過(guò)濾計(jì)數(shù)法和比濁法。
1.平板菌落計(jì)數(shù)法：此法是基于每一個(gè)分散的活菌在適宜的培養(yǎng)基中具有生長(zhǎng)繁殖并能形成一個(gè)菌落的能力。主要有傾注法、涂布法和螺旋接種法。
1.1 傾注法：先往培養(yǎng)皿中傾注一定量的菌液，然后再加入培養(yǎng)基，快速混勻，培養(yǎng)基凝固后，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。多用于菌落總數(shù)計(jì)數(shù)，操作簡(jiǎn)單。
優(yōu)點(diǎn)：接種量可以是0.1-2mL之間，對(duì)微生物計(jì)數(shù)結(jié)果相對(duì)準(zhǔn)確；操作簡(jiǎn)單，適用于各種樣品中菌落總數(shù)的測(cè)定。
缺點(diǎn)：無(wú)法觀察菌落特征，長(zhǎng)在瓊脂內(nèi)部的細(xì)菌分離麻煩，不適于嚴(yán)格好氧菌和熱敏感菌。樣品量多時(shí)，接種前中后工作必須連續(xù)操作，很難簡(jiǎn)化。
1.2 涂布法：先將培養(yǎng)基熔化后趁熱倒入無(wú)菌平板中，待凝固后吸取0.05-0.1mL菌懸液到瓊脂平板上，再用無(wú)菌涂布棒將菌液在平板上涂抹均勻。將涂抹好的平板平放于桌上20 — 30min，使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi)，然后將平板倒轉(zhuǎn)，保溫培養(yǎng)，至長(zhǎng)出菌落后即可計(jì)數(shù)。多用于菌落總數(shù)計(jì)數(shù)，操作簡(jiǎn)單。
優(yōu)點(diǎn)：方便觀察菌落形態(tài)。
缺點(diǎn)：接種量比較少，而且涂布棒會(huì)帶走少量菌液，平行樣間誤差較大。要求樣品懸液中沒(méi)有大顆粒物（否則需要過(guò)濾），相對(duì)傾注法操作比較麻煩。
涂布計(jì)數(shù)法可以將倒平板和接種操作完全獨(dú)立分開(kāi)，適于流水化作業(yè)，適用面更廣，促進(jìn)了商品化成品平板的普及。
1.3 螺旋接種法：商業(yè)化的自動(dòng)螺旋接種設(shè)備以阿基米德螺旋線的形式自動(dòng)接種到瓊脂平板表面，是涂布接種法的升級(jí)。多用于菌落總數(shù)計(jì)數(shù)，適用于接種工作量比較大的單位。
優(yōu)點(diǎn)：方便觀察菌落形態(tài)，均勻性較好，結(jié)果準(zhǔn)確。
缺點(diǎn)：設(shè)備比較貴，啟動(dòng)和收尾工作相對(duì)麻煩。
2.MPN法：這是一種應(yīng)用概率理論來(lái)估算細(xì)菌濃度的方法，多用于檢測(cè)對(duì)檢樣含菌量不確定且精度要求不高樣品。例如食品、水質(zhì)中大腸菌群和食品中金黃色葡萄球菌檢測(cè)。
3.薄膜過(guò)濾計(jì)數(shù)法：適用于檢驗(yàn)含菌量低的液體或者氣體樣品。例如生活飲用水中總大腸菌的檢驗(yàn)，醫(yī)藥用水和無(wú)菌制劑藥品中微生物檢測(cè)。
4.比濁法：適用于檢驗(yàn)含菌量較高，對(duì)結(jié)果準(zhǔn)確度要求不高、時(shí)效性要求比較高的樣品。例如工業(yè)發(fā)酵中菌濃度監(jiān)測(cè)，原料奶新鮮度的美蘭實(shí)驗(yàn)，市場(chǎng)上也有很多自動(dòng)比濁設(shè)備，如ATP熒光儀檢測(cè)儀，微生物生長(zhǎng)曲線檢測(cè)儀……
