濾膜法測定水中大腸桿菌
發(fā)布時間：2023-12-13 瀏覽次數(shù)：964
人們在檢查病原菌污染的飲用水、近海海水和水源水時，經(jīng)常以檢查水中大腸桿菌的數(shù)量作為指標（我國《生活飲用水衛(wèi)生標準》 規(guī)定：每升水中大腸桿菌不多于3個，可作為飲用水）來說明水受人畜糞便污染的程度。
因水中由病人和病畜或帶菌者的糞便污染而來的病原菌數(shù)量很少，不易直接檢查，而水中的大腸桿菌群，如果超過一定數(shù)量，就說明被檢查水可能有病菌存在。
實際上這種檢查過程，首先是應(yīng)用選擇性培養(yǎng)基，將大腸桿菌群從雜菌中分離出來的一種過程。
其檢驗方法有兩種：一是發(fā)酵法，即根據(jù)大腸桿菌群具有能分解乳糖生成CO2等氣體的特性酶，而其他腸道細菌如沙門氏菌屬，由于沒有這種特性酶，不能產(chǎn)氣，可被區(qū)別開來；另一種是濾膜法，它是利用細菌不能通過微孔性薄膜，在抽濾下液體濾過而細菌被截留在膜上，然后用具有高度選擇性的品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基分離培養(yǎng)，本實驗將應(yīng)用這種方法分離鑒定大腸桿菌群。
濾膜法的大致流程：用濾膜過濾待測水樣 → 水樣中的細菌留在濾膜上 → 將濾膜轉(zhuǎn)移到EMB培養(yǎng)基上培養(yǎng) → 統(tǒng)計菌落數(shù)目。
1. 濾膜與濾器的滅菌
1）將濾膜放入燒杯中，加入蒸餾水，于沸水浴中煮沸滅菌三次，每次15分鐘。前二次煮沸后需換水洗滌2-3次，以除去殘留的溶劑。
2）濾器滅菌，用點燃的酒精棉球火焰滅菌，也可用紗布和牛皮紙包裝好于121℃蒸汽下，高壓滅菌20分鐘
2. 分離培養(yǎng)
1）過濾水樣（海水、飲用水、自來水，水庫水及各種水源水），用滅菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣，使粗糙面向上，貼放于已滅菌的濾器上，穩(wěn)妥地固定好濾器，將水樣注入濾器內(nèi)，加蓋，打開濾器閥門，在負0.4大氣壓下抽濾，水樣抽完后，再抽氣5秒鐘，關(guān)上濾器閥門，取下濾器。
2）用滅菌攝于夾濾膜邊緣，移放在EMB培養(yǎng)基平板培養(yǎng)基上，使濾膜的截留細菌面向上，另一面完全緊貼培養(yǎng)基，兩者之間不得留有氣泡，重復(fù)以上的步驟，再接種一、二個平板，倒置培養(yǎng)皿于37℃下培養(yǎng)20-24小時。
3）原理：大腸桿菌在含有伊紅美藍的固體培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）上長出的菌落呈黑色。
3. 含量（污染程度）的計算
1毫升水樣中的大腸桿菌群數(shù)等于濾膜上生長的大腸桿菌群的菌落平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，最后除以樣品的毫升數(shù)，即得。
例如，無菌操作下將90ml無菌水加入到10ml待測水樣中，這樣就將待測水樣稀釋了10倍，將稀釋后的菌液通過濾膜法測得EMB培養(yǎng)基上的菌落數(shù)為45，黑色菌落為5，根據(jù)大腸桿菌鑒定的原理可知，黑色菌落為大腸桿菌，因此1升待測水樣中的大腸桿菌數(shù)目=5×（1000÷10）=500個。
來源：環(huán)凱轉(zhuǎn)載于“學(xué)甫無境”公眾號，作者~ 王甫榮；
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