產(chǎn)品名稱：NLS-Cas9(H840A) Nickase
中文名稱：NLS-Cas9(H840A) 內(nèi)切酶
產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格：
| 編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價格 |
| HKE377 | NLS-Cas9(H840A) Nickase | 50μg/盒 | crispr基因編輯（內(nèi)切酶） | 1575 |
產(chǎn)品描述：
CRISPR/Cas9 是細菌和古細菌在長期演化過程中形成的一種適應(yīng)性免疫防御系統(tǒng)，改造后的 II 型 CRISPR/Cas9 系統(tǒng)在基因的定點修飾中展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用潛能。脫靶效應(yīng)是目前 CRISPR/Cas9 技術(shù)應(yīng)用的一個難題，在基因編輯應(yīng)用中，可能會出現(xiàn)難以預(yù)測的后果。
本制品是 spCas9 Nuclease 的一個突變體。Cas9 Nuclease 具有兩個切割活性中心，從而實現(xiàn)在 sgRNA 靶序列特定位點引入 DNA 雙鏈斷裂（DSB）。NLS-Cas9（H840A）Nickase 在Cas9Nuclease 基礎(chǔ)上突變其中一個切割活性中心，其能在 sgRNA 靶序列所在的DNA 鏈上產(chǎn)生切口，從而形成功能性的單鏈斷裂，并且通過在蛋白兩端加了核定位信號（NLS），可使蛋白進入細胞核內(nèi)進行基因組 編輯，配合一對 gRNA 使用，可實現(xiàn) Cas9 Nuclease 相同的基因編輯效果，由于有效的識別序列由 20 bp 增加至 40 bp，可明顯減少意外的脫靶基因修飾，從而顯著提高CRISPR/Cas9 技術(shù)基因修飾的特異性。
產(chǎn)品特點：純蛋白體系，避免 CRISPR 基因敲除時引入質(zhì)粒或病毒干擾； 可顯著降低脫靶效應(yīng)。
產(chǎn)品用途：
1，基于蛋白與 sgRNA 轉(zhuǎn)染的非病毒載體 CRISPR 基因敲除；
2，基于蛋白與 sgRNA 轉(zhuǎn)染的非病毒載體 CRISPR 基因敲入；
3，sgRNA 剪切靶點 DNA 效率檢測，降低體內(nèi)篩選成本；
4，體外剪切靶 DNA 的特異位點。
應(yīng)用實例：圖例）Cas9(H840A) Nickase DNA 切割活性檢測：
帶有靶位點的超螺旋 DNA（cccDNA）；
酶切產(chǎn)生切刻后的開環(huán) DNA（ocDNA）；
50-100ng 酶可有效切割 cccDNA（>95%）。
保存體系：10mM Tris-HCl，300mM NaCl，0.1mM EDTA，50% Glycerol， PH7.4，25℃。
保存溫度：-20℃保存，或-80℃長期保存。
Cas9(H840A) Nickase 產(chǎn)品包裝（A包裝）：
| 產(chǎn)品組成 | 體積 |
| NLS-Cas9(H840A) Nickase(0.1μg/μl) | 500 μL |
| 10×Reaction Buffer | 1 ml |
質(zhì)量保證：經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE 膠檢測僅可見清晰單一的目的條帶，純度達 95%；內(nèi)毒素含量< 0.1EU/μg；qPCR 方法檢測無大腸桿菌基因組殘留；無 RNase、核酸內(nèi)、外切酶污染。
體外切割體系（20μL）：
| Supercoiled DNA | 200 ng |
| sgRNA | 200 ng |
| NLS-Cas9 H840A Nickase | 50-100 ng |
| 10×Reaction Buffer | 2 μl |
| RNase Free Water | To 20 μl |
37 ℃保溫 1 h、70℃保溫 10 min
注：在反應(yīng)體系中可添加 RNase Inhibitor 至 1U/μl，防止RNase 污染。
相關(guān)產(chǎn)品：
| HKE365 | NLS-Cas9 Nuclease |
| HKE366* | Cas9（D10A）Nickase |
| HKE368** | Cas9（D10A, H840A）Nuclease |
| HKE369 | sgRNA In Vitro one-step Transcription Kit |
| HKE370 | sgRNA Screening and Genotype Confirmation Kit |
* 為 Cas9(D10A) Nickase，能在與 sgRNA 靶序列互補的 DNA 鏈上產(chǎn)生切口，從而形成功能性的單鏈斷裂，可以減少意外的脫靶基因修飾。
** 為 Cas9(D10A, H840A) Nuclease，具有靶 DNA 結(jié)合活性，但無切割活性，可用于陰性對照等用途。
