芽孢染色方法——你get到了嗎？
發(fā)布時間：2023-09-27 瀏覽次數(shù)：9987
通過前文《 一文帶您看懂革蘭氏染色》的學(xué)習(xí)，我們都知道，革蘭氏染色可以對細菌進行染色，區(qū)別其為革蘭氏陽性菌還是革蘭氏陰性菌。但對于帶有芽孢的細菌，在革蘭氏染色時，卻很難著色，如下圖，芽孢游離或位于細菌的一端，但均呈空心狀，未著色。
芽孢到底是個啥？
芽孢是某些芽孢桿菌屬、梭菌屬在其生活史后期形成的抗逆性極強的休眠體，呈圓形、橢圓形，壁厚，含水量極低，對熱、輻射、化學(xué)藥物有很強的抗性，因每一個營養(yǎng)體細胞僅產(chǎn)生一個芽孢，所以芽孢無繁殖功能。細菌芽孢正因其特殊的結(jié)構(gòu)和生理過程，所以對各種殺菌處理有極強的抗性，常常導(dǎo)致熱殺菌食品腐敗變質(zhì)。
那么我們?nèi)绾螌⒀挎哌M行染色，以便在顯微鏡下明確觀察到呢？
經(jīng)典芽孢染色法(Scharffer-Fulton)：
Step1：選取培養(yǎng)至合適時期的芽孢菌，在載玻片上進行涂片，加熱固定；
Step2：滴加5%孔雀石綠，加熱染色5min，使冒蒸汽3-4次，切勿沸騰，中間適當添加染料；
Step3：玻片冷卻后，水洗至流出液無色；
Step4：滴加0.5%沙黃復(fù)染液，染色1min；
Step5：水洗，干燥鏡檢。
染色后菌體為紅色，芽孢綠色。
此方法的優(yōu)點在于：孔雀綠染液對芽孢壁和細胞壁的著色能力很差，因此無需脫色，水洗就能洗去芽孢壁和細胞壁上粘附的染料，而進入芽孢核心的部分卻不能被脫色。
了解了具體操作過程，操作過程中還需要加強注意哪些方面呢？
經(jīng)典芽孢染色法(Scharffer-Fulton)操作要點在于：
1、選取合適細菌生長期的細胞，芽孢是產(chǎn)芽孢桿菌在一定培養(yǎng)條件或生長階段下形成的，選取帶有芽孢、營養(yǎng)菌體共存的菌體是本實驗成功與否的關(guān)鍵。
2、熱固定溫度不宜過高，過高溫度（超200℃）會導(dǎo)致營養(yǎng)體變形；
3、孔雀綠染液加熱充分，需要較高的熱度和較長的時間，且不能沸騰，防止液體飛濺；
4、加熱過程不能干涸，需要中間添加染液，防止孔雀綠染色在玻片上干涸堆積，造成染色背景模糊，不易觀察。
以上就是芽孢染色的步驟和操作要點。怎么樣？講完了，您get到了嗎？
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