SW480細胞培養(yǎng)，人結腸癌細胞培養(yǎng)攻略
發(fā)布時間：2024-01-10 瀏覽次數(shù)：2668
細胞培養(yǎng)是個看似簡單，實則很費心力的工作，今天我們來捋捋這其中的細節(jié)，事無巨細那種的，歡迎大家一起交流討論。
一、SW480細胞特點
SW480 [SW-480] (人結腸癌細胞), 細胞簡稱：SW480 種屬來源：人, 細胞形態(tài)：貼壁，上皮細胞樣，Leibovitz's L-15＋10% FBS＋1% P/S，傳代比例：1:2-1:4，每2-3天換液一次。傳代周期：48-72 h, 培養(yǎng)條件：氣相：5%CO2，溫度：37℃，凍存條件：55%基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO，液氮儲存
二、細胞復蘇（原則 緩凍速溶）：
1. 準備37℃水??；
2. 從液氮中取出細胞；
3. 迅速置37℃水浴，1min內融化；
4. 打開培養(yǎng)基瓶蓋（開蓋前酒精棉擦拭蓋口邊緣），培養(yǎng)基瓶放在瓶架上，瓶蓋放在“非工作區(qū)”，以免工作時污染；
5. 搖出或用取物鉗（用前酒精棉擦拭）取出移液管（頭部不能接觸任何物品）；
6. 用移液管向培養(yǎng)皿（瓶）中加10ml新鮮培養(yǎng)基；
7. 搖出或用取物鉗（用前酒精棉擦拭）取出吸管，安上吸頭，插入滅菌離心管中（吸管頭部不能接觸任何物品）；
8. 用酒精棉擦拭凍存管；
9. 開蓋，將管內液吸入含10ml新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿（瓶），搖勻。
10. 放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，24h后換液。
三、貼壁細胞的傳代培養(yǎng)：
1. 打開培養(yǎng)皿（瓶）蓋（蓋放在“非工作區(qū)”， 蓋、培養(yǎng)皿口不能接觸任何物品），傾斜吸出（可用真空泵）所有的培養(yǎng)基；
2. 加入2ml PBS洗滌，傾斜吸出PBS；
3. 加入0.5ml-1ml胰酶溶液，混勻，傾斜吸出多余胰酶，不必吸干；
4. 37℃消化1-2min左右，顯微鏡下細胞變圓。傾斜培養(yǎng)皿看到少量細胞自由流動即可；
5. 用吸管加入約4ml完全培養(yǎng)基，用吸管將細胞吹打下來；
6. 將細胞懸液分配至新的培養(yǎng)瓶（皿）中，再用移液管加入8ml新鮮的培養(yǎng)基，蓋蓋。
7. 收培養(yǎng)基瓶，蓋蓋；
8. 收離心管，吸管，沖洗；
9. 75％酒精擦臺面，沖洗廢液缸；
10. 關閉超凈工作臺。
四、凍存：
1. 接貼壁細胞的傳代培養(yǎng)中第4步（避免消化時間過長，否則會影響凍存質量）；
2. 用移液管加2ml凍存液，用吸管將細胞吹打下來；
3. 移入2ml凍存管（1ml/管），標記凍存管；
4. 置于液氮液面上；
5. 12－24h后放入液氮，記錄。
另：
完全培養(yǎng)基：基礎培養(yǎng)基＋胎牛血清10％＋雙抗溶液1％
胰酶溶液：0.25％胰酶＋0.02％EDTA-Na2
凍存液：55%胎牛血清+40%基礎培養(yǎng)基+5%DMSO
注：
無菌操作的關鍵是有可能接觸細胞的任何物品不能接觸到為滅菌的物品。
有條件的直接全部一次性。后面一段可以略過。
比較節(jié)約的可以參考如下操作，嚴格來操作的，養(yǎng)細胞也是沒有問題的。
膠頭滴管和移液管清洗步驟：
1. 將滴管（移液管）用尼龍繩捆扎成一捆,每捆約20-30根，捆緊，要求捆起后不會有滴管（移液管）滑出。
2. 放入酸缸泡大于6小時，一般為過夜。
3. 從酸缸中撈起（戴防酸手套），瀝干酸液。
4. 自來水沖洗滴管至沒有黃色后，再用流水沖洗至少10遍，需將酸液完全沖凈，殘留酸液會影響細胞生長。
5. 去離子水沖洗3遍，每次沖洗均換水。
6. 放入烘箱烘干。
7. 從烘箱中取出，滴管（移液管）上邊塞入棉花，不能太緊，以免滴管不好用；也不能太松，以免將棉花吹落。
8. 將塞好棉花的滴管（移液管）放入不銹鋼杯中，高壓滅菌。
9. 高壓滅菌結束，將不銹鋼杯放入烘箱烘干。
10. 從烘箱中取出，一般是備用。
注意事項：
1 培養(yǎng)細胞前，務必查下細胞的培養(yǎng)條件，是需要什么樣的基礎培養(yǎng)基，除了加FBS，還要不要加胰島素，非必須氨基酸等等。
2 保種用的耗材盡量用無菌一次性的，畢竟細胞種子比較珍貴。
3 細胞培養(yǎng)注意要點
? 、該細胞推薦使用Leibovitz's L-15培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，Leibovitz's L-15不可以通入二氧化碳，會產(chǎn)生細胞毒性；
? 、該細胞可用于結腸癌相關基因治療研究。SW480細胞為上皮細胞樣，貼壁生長，細胞多為雙極，伴有微絨毛。該細胞系是合適的轉染宿主，并在裸鼠體內可成瘤，在裸鼠皮下接種10^7個細胞，21天的成瘤率為100%。
來源：環(huán)凱轉載于“ 細胞鏟屎官”公眾號，文章作者~小曼，文章版權歸原作者所有；
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