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菌種的傳代和培養(yǎng)、檢查和復壯、管理

發(fā)布時間:2021-10-27      瀏覽次數(shù):10753    分享:

一、傳代和培養(yǎng)


工作菌種的傳代次數(shù)應嚴格控制,不得超過5代,(從菌種保藏中心獲得的標準菌株為第0代)防止過度的傳代造成菌種變異。

1代是指將活的培養(yǎng)物接種到新鮮培養(yǎng)基中,任何亞培養(yǎng)的形式均被認為是轉(zhuǎn)種或傳代一次。必要時,實驗室應對工作菌株的特性和純度進行確認。

細菌的接種、分離和培養(yǎng)
      常用培養(yǎng)基種類:斜面培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、板培養(yǎng)基。
      接種方法:涂布法、劃線法、穿刺法、直接加入法等
      分離:為了獲得純菌種(株),采用的將細菌分離成單個細胞,使其獨立分裂繁殖形成單個菌落的操作技術(shù)。
      分離一般采用平板培養(yǎng)基。
      分離方法主要有分段劃線法、連續(xù)劃線法、涂布分離法、傾注分離法等。
      培養(yǎng):接種后的培養(yǎng)基,根據(jù)不同微生物生長條件的要求,將培養(yǎng)基放在適宜微生物生長的環(huán)境中(溫度、濕度、氧氣等),使其生長繁殖的過程。需氣菌培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法。

培養(yǎng)后微生物的生長判斷
固體培養(yǎng)基
液體培養(yǎng)基

二、菌種的檢查與復壯


菌種的衰退:菌種經(jīng)過長期人工傳代培養(yǎng)或保藏,由自發(fā)突變的作用而引起某些優(yōu)良特性變?nèi)趸蛳У默F(xiàn)象。

控制菌種的衰退方法

      1,控制傳代次數(shù) 盡量避免不必要的接種和傳代,降低突變幾率。采用良好的傳代保藏方法。《中國藥典》2010年版規(guī)定,傳代次數(shù)不得超過5代。
      2,創(chuàng)造適宜的培養(yǎng)條件
      3,用不同類型的細胞進行傳代
      4,采用有效的保藏方法

定期檢查
      主要檢查項目:菌落形態(tài)、革蘭染色、顯微鏡下菌體形態(tài)、生化特性及血清學檢查。

菌種的復壯: 使衰退的菌種重新恢復原來的優(yōu)良特性的 過程驗室主要采用分離純化的方法。

三、菌種的管理


1、使用菌種的單位,應具備從事微生物工作的條件和設備。 菌種應由專人負責管理,管理人員應具有微生物專業(yè)知識和技術(shù)水平,并應具有較強的責任心。

2、實驗室必須建立菌種保存和使用文件化的程序管理制度;
      包括:每支菌種標注名稱、標準號、接種日期、傳代次數(shù)、進出、收集、貯藏、保存、確認試驗以及銷毀的記錄、標準菌種的申購記錄、從標準菌株到工作菌株操作記錄,如菌種定期轉(zhuǎn)種傳代,鑒定(純度、特性)、培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件、菌種保存的位置和條件及其它需要的程序。

3 、菌種應冷藏或冷凍保存,保存菌種的冰箱不得放置食品和易揮發(fā)性藥品,放置菌種應有專用的冰箱,應上鎖管理。

4、由專人按操作規(guī)程和有關(guān)要求定期進行傳代,并定期對保存的菌種進行檢查,一般每年1~2次,(或定期更換凍干菌種)。發(fā)現(xiàn)菌種的異常情況應及時檢查。一旦發(fā)現(xiàn)菌種污染和變異現(xiàn)象,應立即報告、研究處理。尤其長期保存時。

5、詳細記錄

      菌種的來源、接收、傳代、分離、復壯、使用和鑒定等均應做好詳細記錄。包括菌保存位置、環(huán)境(溫度)、種傳代或使用時間、名稱、菌號、代數(shù)、傳代或保存形式、分離、復壯方式、使用內(nèi)容、鑒定情況等都應進行詳細的記錄。
      菌種不得隨意帶出實驗室,外單位索取、購買應有證明和登記,并包裝嚴密。
      菌種處理應嚴格按操作規(guī)程進行,滅菌處理應有詳細記錄。
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