國(guó)際上沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)在增菌環(huán)節(jié)的差異分析
發(fā)布時(shí)間：2022-04-19 瀏覽次數(shù)：2014
文章來(lái)源：六扇門(mén)Study公眾號(hào)
GB4789.4 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)》于2019 年11月正式啟動(dòng)修訂，標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)過(guò)一年多的修訂，于2021 年 11 月 29 日經(jīng)第二屆食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)審評(píng)委員會(huì)微生物檢驗(yàn)方法與規(guī)程專業(yè)委員會(huì)第七次會(huì)議審查通過(guò)，現(xiàn)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)公開(kāi)征求意見(jiàn)。
小六趕緊對(duì)比了GB4789.4 -2016版、GB4789.4 征求意見(jiàn)版、ISO、美國(guó)FDA/BAM方法的增菌環(huán)節(jié)的差異，分享給各位小伙伴們。
小六號(hào)召：
大家在能力范圍內(nèi)積極支持標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作，結(jié)合實(shí)際工作經(jīng)驗(yàn)，為GB4789.4征求意見(jiàn)稿提出意見(jiàn)！這有助于提高本次標(biāo)準(zhǔn)修訂效率和實(shí)用性，畢竟將來(lái)標(biāo)準(zhǔn)是我們來(lái)使用哈。
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https://sppt.cfsa.net.cn:8086/cfsa_aiguo
前增菌環(huán)節(jié)差異分析
1、增菌培養(yǎng)基
FDA/BAM 方法主要使用的前增菌液為乳糖肉湯（LB )增菌液（BAM方法使用的前增菌處理根據(jù)不同的樣品特性，使用的前增菌培養(yǎng)基不同），此外還有：
通用肉湯（UPB）、胰酪胨大豆肉湯（TSB）、四硫磺酸鹽煌綠基礎(chǔ)（TTB，不加煌綠）、緩沖蛋白胨水（BPW）、復(fù)溶脫脂乳粉等。
GB 4789.4和 ISO 6579-1：2017 方法使用的前增菌液為緩沖蛋白胨水（BPW）增菌液。
LB 增菌液（LB )增菌液（主要成分為牛肉膏、蛋白胨、乳糖, pH 為 6.9±0.2,）的營(yíng)養(yǎng)較BPW 增菌液（主要成分為蛋白胨、氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀, pH 為 7.2±0.2）更豐富，但BPW 增菌液的緩沖能力更強(qiáng)。
想了解更多BAM方法相關(guān)培養(yǎng)基適用范圍，可關(guān)注六扇門(mén)Study公眾號(hào)發(fā)布的文章《一眼讀懂國(guó)際主要沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)方法之異同》。
2、操作環(huán)節(jié)
（1）樣品稀釋處理：GB 4789.4和 ISO 6579-1：2017 方法都是25g（mL）+225mL BPW前處理，GB4789.4方法是36 ℃±1 ℃， 8 h～18 h； ISO 6579-1：2017 為36℃±2℃，18±2h，整體相差不大。而美國(guó)FDA/BAM方法則是25g+225mL樣品LB（也可以按照1:9的比例制備樣品），35℃±2℃，24±2h，也就是取樣可根據(jù)相應(yīng)比例進(jìn)行處理。
（2）乳粉的前處理：GB4789-XXX本次征求意見(jiàn)稿、ISO 6579-1：2017 、美國(guó)FDA/BAM都采取了室溫浸泡法，即：無(wú)菌操作稱取 25 g /25 mL樣品，緩緩傾倒在廣口瓶或均質(zhì)袋內(nèi) 225 mL BPW 的液體表面（BAM方法也可以按照1:9的比例制備樣品），暫不混勻和調(diào)節(jié) pH，室溫靜置 1 h 后再混勻。
主要原因：乳粉是經(jīng)過(guò)高溫噴霧干燥的產(chǎn)品，其中的沙門(mén)氏菌一般處于受損狀態(tài)。乳粉中沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)的前處理，如果進(jìn)行快速混勻，適應(yīng)了乳粉干燥環(huán)境的受損沙門(mén)氏菌可能會(huì)出現(xiàn)滲透壓休克。采用浸泡法室溫靜置一段時(shí)間后再進(jìn)行預(yù)增菌，可以促進(jìn)受損沙門(mén)氏菌的復(fù)蘇。
選擇性增菌環(huán)節(jié)差異分析
二次增菌液選擇上，F(xiàn)DA/BAM 主要為 TTB 和 RV （大部分食品）, ISO為 RVS/MSRV 和MKTTn , GB 4789.4-2016為 TTB 和 SC ；GB4789.4-XXXX征求意見(jiàn)為 RVS 和 TTB 。RV 和 RVS 增菌液的成分基本一致（但 RVS 用大豆胨代替了蛋白胨，更有利于沙門(mén)氏菌的復(fù)蘇）。MKTTn較 TTB增菌液增加了新生霉素, 其余成分基本一致, 新生霉素可以抑制大腸群菌和其他革蘭氏陽(yáng)性桿菌。FDA/BAM 在不同類(lèi)型樣本的前處理方法有區(qū)別。
幾種選擇性培養(yǎng)基介紹：
RV： 含大豆胨、六水合氯化鎂、氯化鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、孔雀綠、蒸餾水?？兹妇G能夠抑制非沙門(mén)氏菌的生長(zhǎng)。
RVS： 主要成分與RV基本一致，但用大豆胨代替了蛋白胨，更有利于沙門(mén)氏菌的復(fù)蘇。
MSRV ： 含胰蛋白胨 、酪蛋白水解物 、氯化鈉 、磷酸二氫鉀 、氯化鎂(無(wú)水) 、孔雀綠草酸鹽、瓊脂 、蒸餾水，需要添加新霉素一起使用。
TTB： 含蛋白胨、膽鹽、碳酸鈣、硫代硫酸鈉、蒸餾水。牛膽鹽和煌綠可抑制大腸群菌和其它革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。
MKTTn： 胰蛋白胨、牛肉粉 、氯化鈉 、碳酸鈣 、牛膽鹽 、硫代硫酸鈉、煌綠 、新生霉素 、蒸餾水。牛膽鹽、新生霉素可抑制大腸群菌和其它革蘭氏陽(yáng)性桿菌。
由于SC 適用于傷寒沙門(mén)氏菌的選擇性增菌，我國(guó)傷寒、副傷寒的發(fā)病率已從10 例/10 萬(wàn)下降到 0.8 例/10萬(wàn)左右，本次GB4789修訂用 RVS 代替 SC 作為食品中沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)的選擇性增菌液。
與此同時(shí)，GB4789.40-XXXX《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 克羅諾桿菌檢驗(yàn)》和GB XXXX- XXXX《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 產(chǎn)志賀毒素大腸埃希氏菌檢驗(yàn)》也在征求意見(jiàn)中，歡迎大家積極發(fā)表意見(jiàn)。
