生長曲線法評估膽鹽抑菌能力
發(fā)布時間：2022-11-02 瀏覽次數(shù)：4605
為了精確評估膽鹽的抑菌能力，正確指導不同種類、不同批次膽鹽的最適用量。趙貴明等人利用全自動生長曲線分析儀，設置對照品和固定測試菌株，通過比較對照品膽鹽與測試品膽鹽對于敏感性測試菌株的 MIC 和 MBC 值，得以精確測定膽鹽的效價。通過此方法，比較了不同品牌不同批次的膽鹽對不同菌的抑制效果，很好的指導了膽鹽的最適用量。具體內(nèi)容如下：
(1)測試用菌株及試劑
藤黃微球菌(Micrococcus Luteus )菌種號(ATCC 49732)或表皮葡萄球菌( Staphylo-coccus epidermidis )菌種號(ATCC 12228)、3號膽鹽(Oxoid)、磷酸鹽緩沖溶液、生理鹽水、待測膽鹽、去氧膽酸鈉，哥倫比亞血瓊脂平板(Oxoid)、TSB液體培養(yǎng)基(Oxoid)。
(2)儀器設備
恒溫培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、微量移液器(20μL~200μL、100μL~1000uL)、麥氏比濁管、比濁儀、Bioscreen全自動生長曲線分析儀。
(3)菌懸液的制備
將敏感性測試菌株活化后接種于哥倫比亞血瓊脂平板，經(jīng)36°C±1°C培養(yǎng) 18h~24h，直至出現(xiàn)明顯菌落。挑取3~5個菌落，分散于TSB液體培養(yǎng)基中制成菌懸液。將菌懸液的濁度調(diào)整至0.5 麥氏比濁標準，此時菌懸液的濃度為 1.5×10? CFU/mL。
(4)不同濃度膽鹽培養(yǎng)基的制備
向TSB液體培養(yǎng)基中加人作為標準的 Oxoid 3號膽鹽，配置成膽鹽濃度分別為0.05%、0.1%、0.15%、0.2%、0.25% 和 0.3% 的TSB液體培養(yǎng)基。其他待測膽鹽按照相應比例配成相應的 TSB液體培養(yǎng)基，待測膽鹽濃度最大設置為 0.5%。
(5) MIC 和 MBC 的測定
取30μL菌懸液接種于 270μL 相應的含膽鹽的TSB培養(yǎng)基中，置于 Bioscreen 全自動生長曲線分析儀中，37°C培養(yǎng)48h，每15min 測一次濁度值。測試菌株的生長曲線見圖4-7-2。每個實驗測試 3 個平行樣，取平均值繪制菌種生長曲線，最小抑菌濃度 MIC 是膽鹽能夠完全抑制細菌生長的最低藥物濃度，記錄不同膽鹽對敏感性測試菌株的 MIC 值。
48h之后，在全自動生長曲線分析儀中每一個樣品管中取 200μL 菌液均勻的涂在哥倫比亞血瓊脂平板上，36°C±°1C培養(yǎng)48h，觀察平板上的菌落數(shù)。最小殺菌濃度 MBC 是膽鹽能夠殺死 99.9% 的細菌(降低3個數(shù)量級)所需的最低藥物濃度，記錄不同膽鹽對敏感性測試菌株的MBC值。
通過比較對照品膽鹽與測試品膽鹽對于敏感性測試菌株的 MIC 和 MBC (見表4-7-1)，進而評估測試樣品的抑菌能力，指導膽鹽、去氧膽酸鈉在培養(yǎng)基中的準確用量，提高培養(yǎng)基的適用性。
表4-7-1 對照品膽鹽與測試品膽鹽對于敏感性測試菌株的 MIC 和 MBC 值
還可以比較分析不同結(jié)構(gòu)的膽汁酸對不同菌株的抑菌能力(見表4-7-2)。
表4-7-2 不同結(jié)構(gòu)膽鹽對于敏感性測試菌株的 MIC 和 MBC 值
通過實驗，得知膽鹽的抑菌效果與膽汁酸羥基位置和所抑制的菌種相關。如抑制藤黃微球菌的效果比較，豬膽鹽(3??，6??，7??)>牛膽鹽(3??，7??，12??)>3號膽鹽(混合膽鹽)>脫氧膽鹽(3??，12??)；抑制表皮葡萄球菌時，豬膽鹽(3??，6??，7??)>脫氧膽鹽(3??，12??)>牛膽鹽(3??，7??，12??)>3號膽鹽(混合膽鹽)。
來源：《微生物培養(yǎng)基及其原材料質(zhì)量控制》電子書
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