CCK-8的實驗過程注意細節(jié)
發(fā)布時間：2023-03-17 瀏覽次數(shù)：1083
普遍認為，CCK-8是操作更簡單、數(shù)據(jù)更穩(wěn)定、靈敏度也較高的細胞增殖與毒性檢測方法。CCK-8實驗過程簡單總結為配置細胞懸液、加入待測物質(zhì)、待測物質(zhì)與細胞共同孵育一定時間、加入CCK-8、測定吸光度五步。但其中仍有需要注意的地方，值得探討學習。
CCK-8的實驗過程注意細節(jié)
01 配置細胞懸液
a. 如果是第一次做或者第一次種此類細胞，建議先做幾個孔去摸索接種數(shù)量和培養(yǎng)時間；
b. 細胞懸液一定要混合均勻，避免其沉淀導致每個孔的細胞數(shù)量不一樣。
建議在培育時間內(nèi)不要讓細胞長得太滿，其一無法判斷是否堆積生長會影響藥物進入細胞進而影響OD值，其二生長不均勻會導致孔間OD值偏差較大，影響最終結果。
02 加入CCK-8溶液后孵育的時間
孵育時間與細胞類型和種植細胞的密度是正相關的，建議設定一系列梯度時間分別進行監(jiān)測，選取吸光度范圍比較適宜的時間點用于后續(xù)的實驗。
此外，考慮到孵育過程每孔蒸發(fā)量不一樣，所以在加CCK-8時，可以將舊的培養(yǎng)基吸出，然后加入新鮮的培養(yǎng)基與CCK-8混勻液（100：10），再進行檢測。
03 OD值的檢測
影響OD值的因素很多，比如細胞密度、孵育時間、檢測時孔里有氣泡等。
a. OD值過高可以適當減少細胞數(shù)量和縮短共同孵育時間；
b. OD值過低則可以適當增加細胞量與延長加入CCK-8試劑后的反應時間。
建議將OD值控制在1.0左右附近，酶標儀與UV的原理類似，都有一個最佳的檢測范圍超過了這個范圍數(shù)據(jù)就會不穩(wěn)定，因此為了避免讀數(shù)不準確要根據(jù)自己的數(shù)據(jù)范圍設定具體的實驗細節(jié)。
來源：“金沙生物”公眾號
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