SW480細(xì)胞培養(yǎng)，人結(jié)腸癌細(xì)胞培養(yǎng)攻略
發(fā)布時(shí)間：2024-01-10 瀏覽次數(shù)：2667
細(xì)胞培養(yǎng)是個(gè)看似簡(jiǎn)單，實(shí)則很費(fèi)心力的工作，今天我們來(lái)捋捋這其中的細(xì)節(jié)，事無(wú)巨細(xì)那種的，歡迎大家一起交流討論。
一、SW480細(xì)胞特點(diǎn)
SW480 [SW-480] (人結(jié)腸癌細(xì)胞), 細(xì)胞簡(jiǎn)稱(chēng)：SW480 種屬來(lái)源：人, 細(xì)胞形態(tài)：貼壁，上皮細(xì)胞樣，Leibovitz's L-15＋10% FBS＋1% P/S，傳代比例：1:2-1:4，每2-3天換液一次。傳代周期：48-72 h, 培養(yǎng)條件：氣相：5%CO2，溫度：37℃，凍存條件：55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO，液氮儲(chǔ)存
二、細(xì)胞復(fù)蘇（原則 緩凍速溶）：
1. 準(zhǔn)備37℃水?。?br />2. 從液氮中取出細(xì)胞；
3. 迅速置37℃水浴，1min內(nèi)融化；
4. 打開(kāi)培養(yǎng)基瓶蓋（開(kāi)蓋前酒精棉擦拭蓋口邊緣），培養(yǎng)基瓶放在瓶架上，瓶蓋放在“非工作區(qū)”，以免工作時(shí)污染；
5. 搖出或用取物鉗（用前酒精棉擦拭）取出移液管（頭部不能接觸任何物品）；
6. 用移液管向培養(yǎng)皿（瓶）中加10ml新鮮培養(yǎng)基；
7. 搖出或用取物鉗（用前酒精棉擦拭）取出吸管，安上吸頭，插入滅菌離心管中（吸管頭部不能接觸任何物品）；
8. 用酒精棉擦拭凍存管；
9. 開(kāi)蓋，將管內(nèi)液吸入含10ml新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿（瓶），搖勻。
10. 放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，24h后換液。
三、貼壁細(xì)胞的傳代培養(yǎng)：
1. 打開(kāi)培養(yǎng)皿（瓶）蓋（蓋放在“非工作區(qū)”， 蓋、培養(yǎng)皿口不能接觸任何物品），傾斜吸出（可用真空泵）所有的培養(yǎng)基；
2. 加入2ml PBS洗滌，傾斜吸出PBS；
3. 加入0.5ml-1ml胰酶溶液，混勻，傾斜吸出多余胰酶，不必吸干；
4. 37℃消化1-2min左右，顯微鏡下細(xì)胞變圓。傾斜培養(yǎng)皿看到少量細(xì)胞自由流動(dòng)即可；
5. 用吸管加入約4ml完全培養(yǎng)基，用吸管將細(xì)胞吹打下來(lái)；
6. 將細(xì)胞懸液分配至新的培養(yǎng)瓶（皿）中，再用移液管加入8ml新鮮的培養(yǎng)基，蓋蓋。
7. 收培養(yǎng)基瓶，蓋蓋；
8. 收離心管，吸管，沖洗；
9. 75％酒精擦臺(tái)面，沖洗廢液缸；
10. 關(guān)閉超凈工作臺(tái)。
四、凍存：
1. 接貼壁細(xì)胞的傳代培養(yǎng)中第4步（避免消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響凍存質(zhì)量）；
2. 用移液管加2ml凍存液，用吸管將細(xì)胞吹打下來(lái)；
3. 移入2ml凍存管（1ml/管），標(biāo)記凍存管；
4. 置于液氮液面上；
5. 12－24h后放入液氮，記錄。
另：
完全培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基＋胎牛血清10％＋雙抗溶液1％
胰酶溶液：0.25％胰酶＋0.02％EDTA-Na2
凍存液：55%胎牛血清+40%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO
注：
無(wú)菌操作的關(guān)鍵是有可能接觸細(xì)胞的任何物品不能接觸到為滅菌的物品。
有條件的直接全部一次性。后面一段可以略過(guò)。
比較節(jié)約的可以參考如下操作，嚴(yán)格來(lái)操作的，養(yǎng)細(xì)胞也是沒(méi)有問(wèn)題的。
膠頭滴管和移液管清洗步驟：
1. 將滴管（移液管）用尼龍繩捆扎成一捆,每捆約20-30根，捆緊，要求捆起后不會(huì)有滴管（移液管）滑出。
2. 放入酸缸泡大于6小時(shí)，一般為過(guò)夜。
3. 從酸缸中撈起（戴防酸手套），瀝干酸液。
4. 自來(lái)水沖洗滴管至沒(méi)有黃色后，再用流水沖洗至少10遍，需將酸液完全沖凈，殘留酸液會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)。
5. 去離子水沖洗3遍，每次沖洗均換水。
6. 放入烘箱烘干。
7. 從烘箱中取出，滴管（移液管）上邊塞入棉花，不能太緊，以免滴管不好用；也不能太松，以免將棉花吹落。
8. 將塞好棉花的滴管（移液管）放入不銹鋼杯中，高壓滅菌。
9. 高壓滅菌結(jié)束，將不銹鋼杯放入烘箱烘干。
10. 從烘箱中取出，一般是備用。
注意事項(xiàng)：
1 培養(yǎng)細(xì)胞前，務(wù)必查下細(xì)胞的培養(yǎng)條件，是需要什么樣的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，除了加FBS，還要不要加胰島素，非必須氨基酸等等。
2 保種用的耗材盡量用無(wú)菌一次性的，畢竟細(xì)胞種子比較珍貴。
3 細(xì)胞培養(yǎng)注意要點(diǎn)
? 、該細(xì)胞推薦使用Leibovitz's L-15培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，Leibovitz's L-15不可以通入二氧化碳，會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性；
? 、該細(xì)胞可用于結(jié)腸癌相關(guān)基因治療研究。SW480細(xì)胞為上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞多為雙極，伴有微絨毛。該細(xì)胞系是合適的轉(zhuǎn)染宿主，并在裸鼠體內(nèi)可成瘤，在裸鼠皮下接種10^7個(gè)細(xì)胞，21天的成瘤率為100%。
來(lái)源：環(huán)凱轉(zhuǎn)載于“ 細(xì)胞鏟屎官”公眾號(hào)，文章作者~小曼，文章版權(quán)歸原作者所有；
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