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β型溶血性鏈球菌的生物學(xué)特性
β型溶血性鏈球菌：鏈球菌屬中一類在血平板上能形成β型溶血圈的細菌，以釀膿（或A群）鏈球菌及無乳（或B群）鏈球菌為主。
生物學(xué)特性：革蘭氏陽性菌，呈球形或橢圓形，呈鏈狀排列，長短不一，從4-8個至20-30個菌細胞組成不等，鏈的長短與細菌的種類及生長環(huán)境有關(guān)。該菌不形成芽孢，無鞭毛，需氧或兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求較高。
流行學(xué)特征：廣泛分布于自然界、人及動物糞便和健康人的鼻咽部。可通過直接接觸、空氣飛沫傳播或通過皮膚、粘膜傷口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也會對人類進行感染。上呼吸道感染患者、人畜化膿性感染部位β型常成為食品污染的污染源。
對人毒力較強，產(chǎn)生β型溶血的A群鏈球菌引起化膿性感染、中毒性疾病及超敏反應(yīng)性疾病。產(chǎn)生β型溶血的B群鏈球菌能引起牛乳房炎，嚴重危害畜牧業(yè)，該菌也能感染人類，尤其是新生兒可引起敗血癥、腦膜炎、肺炎等，死亡率極高，并可產(chǎn)生神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥。
β型溶血性鏈球菌的檢驗
操作注意事項
1：當對易產(chǎn)生較大顆粒的樣品（如肉類）進行檢測時，建議使用帶 濾網(wǎng)均質(zhì)袋，以方便均質(zhì)后用吸管吸取勻液；
2：使用均質(zhì)袋進行前增菌時，應(yīng)使用帶有底托的均質(zhì)袋架子，防止培養(yǎng)過程中前增菌袋子歪倒泄漏污染培養(yǎng)箱；
3：在使用VITEK2 Compact全自動微生物分析系統(tǒng)進行鑒定時，應(yīng)結(jié)合其他生物學(xué)特性綜合評價后判斷結(jié)果。如遇待測菌鑒定評分過低，多個生化反應(yīng)結(jié)果不符貨48h生化反應(yīng)仍不明顯的情況，應(yīng)考慮鏈球菌乳化程度不夠，呈顆粒狀，不能形成均勻的菌懸液有關(guān)，此時應(yīng)重復(fù)試驗或改用其它方法鑒定；
4：培養(yǎng)箱中疊放培養(yǎng)皿時，為防止中間平皿過熱，高度不得超過6個平板。
培養(yǎng)基原理解析
? 胰蛋白胨、植物蛋白胨提供氮源、維生素和生長因子；葡萄糖提供碳源；磷酸氫二鉀為緩沖劑；氯化鈉維持均衡的滲透壓；多粘菌素及萘啶酮酸用于抑制非鏈球菌的生長。
2、哥倫比亞CNA血平板
? 酵胰酪蛋白胨、動物組織 蛋白消化液、酵母提取物、牛肉提取物、淀粉提供碳氮源、維生素和生長因子；羊血是細菌生長繁殖的良好營養(yǎng)物質(zhì)。在45～50℃的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入血液可以保存血液中某些不耐熱的生長因子，同時血球不被破壞。瓊脂是凝固劑，多粘菌素B、萘啶酸能抑制雜菌生長。
灰白色、半透明、光滑、圓形邊緣整齊菌落，具有無色透明的溶血環(huán)
生化鑒定原理解析
1、觸媒試驗
? 大多需氧和兼性厭氧菌均產(chǎn)生過氧化氫酶，但鏈球菌屬陰性，故常用此試驗來鑒定。
? 結(jié)果判讀：立即產(chǎn)生氣泡+，不產(chǎn)生氣泡-。
? 不宜用血平板上生長的菌落，因紅細胞含有過氧化氫酶，可致假陽性反應(yīng)。
β型溶血性鏈球菌 觸酶+
2、鏈激酶試驗
? 健康人的血漿中含有一種酶原，稱為胞漿原。胞漿原在正常狀態(tài)下不活動，如被溶血性鏈球菌產(chǎn)生的激活酶作用后，胞漿原即變?yōu)榛顒有缘陌麧{素，能溶解纖維蛋白。
? 結(jié)果判讀：血漿混合物凝固后36±1℃繼續(xù)培養(yǎng)24小時，凝塊重新溶解為陽性。
質(zhì)量控制及疑難解析
質(zhì)量控制
1、實驗室過程中，每批預(yù)增菌液、選擇性增菌液、分離平板等都要做空白對照。以掌握檢驗過程中是否存在來自檢驗環(huán)境的污染。
2、定期使用β型溶血性鏈球菌ATCC19615或相應(yīng)定量活菌參考品，在P2實驗室或陽性對照實驗室內(nèi)，用適當?shù)氖称窐悠愤M行陽性實驗驗證，污染劑量應(yīng)控制在10-100CFU/25g，并進行記錄，驗證實驗至少每2個月進行1次。
3、每2個月將所使用的培養(yǎng)基和生化試劑用的標準菌株或陰性菌株進行驗證，并進行記錄。
疑難解析
問：在前增菌或選擇性增菌結(jié)束后，肉湯未見微生物生長，是否可以終止實驗？
答：不可以，因為肉湯可見的細菌濃度為107CFU/ml，在此濃度一下，肉眼不能發(fā)現(xiàn)微生物生長，但實際溶液中有微生物生長。
問：β型溶血性鏈球菌和乙型溶血性鏈球菌是一種菌嗎?
答：是的，同一種不同名稱。
問：β型溶血性鏈球菌為什么要在厭氧條件下培養(yǎng)?
答：厭氧條件下哥倫比亞CAN選擇性瓊脂平板更適合溶血性鏈球菌的分離培養(yǎng)，主要表現(xiàn)為菌落形態(tài)典型、溶血現(xiàn)象更為明顯，同時抑制了需氧菌及干擾菌的生長。
所需培養(yǎng)基試劑
用途 | 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
增 菌 | 024051 | 胰蛋白胨大豆肉湯（TSB） | 250g/瓶 |
024051P1 | 胰蛋白胨大豆肉湯（TSB） | 250g/瓶 | |
SR0310 | 改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基配套試劑 | 10支/盒 | |
平 板 分 離 | 024066 | 哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基 | 250g/瓶 |
SR0420 | 哥倫比亞CNA血瓊脂配套試劑 | 10支/盒 | |
CP0910 | 哥倫比亞CAN血平板 | 90mm×20個 | |
純 培 養(yǎng) | 024061 | 哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基 | 250g/瓶 |
CP0160 | 哥倫比亞血平板 | 90mm×20個 | |
生化鑒定 | 029180 | 革蘭氏染色液 | 10mL×4瓶 |
029270 | 凍干草酸鉀兔血漿 | 10支/盒 | |
029280 | 0.25%氯化鈣溶液 | 10支/盒 |
