動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)4大常用合成培養(yǎng)基
發(fā)布時(shí)間：2023-05-26 瀏覽次數(shù)：714
體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞已經(jīng)有近百年的歷史，但該技術(shù)真正得以廣泛應(yīng)用及各種類(lèi)型組織細(xì)胞大量體外培養(yǎng)成功是由于適合細(xì)胞體外生長(zhǎng)需要的合成培養(yǎng)基的問(wèn)世。合成培養(yǎng)基是對(duì)細(xì)胞體內(nèi)生存環(huán)境中各種已知物質(zhì)在體外人工條件下的模擬。這種模擬不是被動(dòng)的、不加選擇的，而是在體外反復(fù)實(shí)驗(yàn)和篩選，進(jìn)行強(qiáng)化和重新組合后形成的人工合成培養(yǎng)基。
合成培養(yǎng)基種類(lèi)很多，據(jù)報(bào)道已有數(shù)十種，每種合成培養(yǎng)基最初都是為培養(yǎng)某種細(xì)胞而設(shè)計(jì)的，但應(yīng)用后發(fā)現(xiàn)其他細(xì)胞也可以生長(zhǎng)或經(jīng)改良也適合其他細(xì)胞的生長(zhǎng)。
199培養(yǎng)基
199培養(yǎng)基是Morgan、Morton及Parker等人在1950年為培養(yǎng)雞胚細(xì)胞研制的。最初是在Earle生理鹽水溶液的基礎(chǔ)上添加各種物質(zhì)如氨基酸。維生素，然后又補(bǔ)加嘌呤、喀啶、膽固醇、ATP等進(jìn)行試驗(yàn)性研究，并根據(jù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的特點(diǎn)進(jìn)一步完善其配方。
199培養(yǎng)基含有69種成分。其組成成分雖然很多，但單獨(dú)使用時(shí)只能維持細(xì)胞存活數(shù)天，在加入血清后可以維持很多種細(xì)胞的生長(zhǎng)。由干成分較為復(fù)雜，現(xiàn)在一般應(yīng)用不多。后在199基礎(chǔ)上改良研制了109合成培養(yǎng)基，與199相比較效果較好。
Eagle's培養(yǎng)液
Parker等根據(jù)氨基酸和維生素等物質(zhì)的生理含量制備出一種基本培養(yǎng)液，后來(lái)Eagle等對(duì)來(lái)源于人的細(xì)胞株進(jìn)行更深入的研究后發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)內(nèi)的氨基酸及維生素的含量比基本培養(yǎng)液中大1~5倍而且其中谷氨酰胺等13種氨基酸和8種維生素是必需的，于是將這些物質(zhì)的濃度調(diào)整至接近胞質(zhì)內(nèi)含量的水平，制成了最低限度培養(yǎng)液(Eagle's minimum essential medium,MEM)，MEM是常用的培養(yǎng)液。
后來(lái)研究人員在MEM基礎(chǔ)上又改良研究制成了BME (Basal Eagle medium)和 DMEM(Dulbecco MEM)兩種培養(yǎng)液。BME去除了MEM成分中的一部分必需氨基酸，增添了一些非必需氨基酸。DMEM是在MEM基礎(chǔ)上增加了各成分的用量，又可分為高糖型及低糖型。高糖型含葡萄糖4500 mg/L，低糖型含量為1000mg/L。高糖型適用于生長(zhǎng)較快，附著性差的腫瘤細(xì)胞，例如雜交瘤中骨髓瘤細(xì)胞，DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞等的培養(yǎng)。
RPMI 1640培養(yǎng)液
RPMI 1640是由Moor等研究成功的，最初為培養(yǎng)小鼠白血病細(xì)胞的需要而制備。開(kāi)始的配方特別適合懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)，主要針對(duì)淋巴細(xì)胞，后經(jīng)幾次改良從 RPMI 1630、1634，至RPMI 1640。其組成較為簡(jiǎn)單，但可以適應(yīng)很多種類(lèi)細(xì)胞的生長(zhǎng)。不僅腫瘤細(xì)胞，而且很多正常組織細(xì)胞都可用RPMI 1640進(jìn)行體外培養(yǎng)。大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室數(shù)年來(lái)將RPMI 1640作為實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞維持的基本培養(yǎng)液，用它培養(yǎng)了包括癌細(xì)胞和正常細(xì)胞在內(nèi)的數(shù)十種細(xì)胞，無(wú)論是原代和長(zhǎng)期傳代等效果都很好。目前RPMI 1640是應(yīng)用最為廣泛的培養(yǎng)基之一。
Ham培養(yǎng)液
1962年Ham研究了適合小鼠二倍體細(xì)胞克隆化的培養(yǎng)基，將其命名為F7，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行改良成為F10培養(yǎng)基，使之不僅適應(yīng)小鼠細(xì)胞，而且也適用于人類(lèi)二倍體細(xì)胞的培養(yǎng)。Ham 1965年繼續(xù)研究制成了F12培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基的特點(diǎn)是在配方中加入了一些微量元素和無(wú)機(jī)離子，可以在加入很少血清的情況下應(yīng)用，特別適合進(jìn)行單細(xì)胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng)，是無(wú)血清培養(yǎng)中常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
上述4種是最為常用的培養(yǎng)基。目前雖然各種合成培養(yǎng)基有幾十種，多以上述4種為基礎(chǔ)加以改良而制成。實(shí)驗(yàn)者可參考有關(guān)文獻(xiàn)或根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要在定型的合成培養(yǎng)基基礎(chǔ)上進(jìn)行增減和選擇。如果不是特殊需求，上述培養(yǎng)基基本上可以滿足絕大部分細(xì)胞培養(yǎng)的需要。
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